【摘要】目的：建立汉防己甲素（TET）微乳中TET含量的测定方法。方法：采用Hypersil ODS-C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）色谱柱，以甲醇-水-三乙胺（85∶15∶0.03）为流动相，检测波长为215nm。结果：TET在2～10 μg/mL范围内成良好的线性关系，线性方程为Y=175103X+54534，r=0.9998，加样回收率为100.5%，RSD=1.0%。结论：该方法简便、准确、灵敏，可用于TET微乳的质量控制。
【关键词】高效液相色谱法；汉防己甲素；微乳；含量测定
文章编号：1009-5519（2008）18-2746-02 中图分类号：R9 文献标识码：A
汉防己甲素（tetrandrine，TET）是从千金藤属防己科植物粉防己（Stephania tetrandra S.Moore）的干燥块根中提取的一种有效成分，为双苄基异喹啉类生物碱[1]。药理研究证实，Tet是一种钙离子拮抗剂，主要作用于钙离子通道，影响钙离子的跨膜转运及在细胞内的分布利用，TET的抗心律失常、抗高血压、抗肿瘤多药耐药性等方面的作用都与其直接或间接拮抗钙通道和钙调蛋白有关，近年来发现其在抗肝纤维化方面有较强活性[2]。微乳(microemulsion，ME)是由油相、水相、乳化剂及助乳化剂组成的一种外观澄明的热力学稳定系统[3]。ME具有增大药物的溶解度，提高药物的稳定性和生物利用度，降低药物毒性反应等优点，是一种非常有前景的药物载体[4]。我们制备了TET微乳，现采用HPLC法测定其中汉防己甲素的含量，以控制制剂的质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器：LC-10AT高效液湘色谱仪（日本，岛津）、2487紫外检测器（日本，岛津） Hypersil ODS-C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）色谱柱、LCsolution工作站、电子分析天平(梅特勒XS205)、超声仪。
1.2 药品与试剂：TET对照品（中检所提供批号110711-200406 供含量测定）；TET(杭州富马化工公司批号20060923)；TET微乳（自制）；空白微乳（自制）；甲醇（色谱纯，上海振兴化工一厂）；水为反渗透超纯水；其他试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 色谱条件：Hypersil ODS-C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：甲醇-水-三乙胺（85∶15∶0.03），流速0.8 ml/min，检测波长：215 nm，进样量：20 μl，柱温25 ℃。
2.2 样品溶液的制备
2.2.1 对照品溶液液：精密称取TET对照品5.0 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
2.2.2 供试品溶液：精密吸取TET微乳0.2 ml，置10 ml量瓶中，加无水乙醇适量，超声6 min，放冷，再加无水乙醇稀释至刻度，混匀，精密吸取1 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。
2.2.3 阴性对照溶液：取空白ME 0.2 ml，置10 ml量瓶中，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液[5]。
2.3 波长的选择：取对照品溶液0.6 ml，加甲醇制成6 μg/ml的溶液，在波长200~350 nm进行紫外扫描，结果TET在（215±5）nm有最大吸收峰，故选择215 nm作为检测波长。
2.4 可行性试验：按照上述色谱条件，分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各20 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果供试品溶液在对照品溶液相对应位置上有色谱峰，阴性对照溶液无干扰。
2.5 线性关系考察：取对照品溶液1、0.8、0.6、0.4、0.2 ml，分别置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取20 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积值，以浓度C对峰面积 Y作图，得回归方程为Y=175103C+54534，r=0.9998，TET在2～10 μg/ml范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验：取2.5项下浓度为6 μg/ml的同一份对照品溶液，连续进样6次，每次20 μl，测定峰面积，结果RSD=0.7%，表明精密度良好。
2.7 样品溶液稳定性试验：取供试品溶液，分别在0、2、4、6、8h进样20 μl，测定峰面积，RSD=1.2%，表明供试品溶液在8h内稳定。
2.8 重现性试验：取同一批ME，按照供试品溶液项下方法制成6份样品溶液，分别测定TET峰面积，结果RSD=1.0%，表明重现性良好。
2.9 加样回收率试验：取空白ME适量，置5 ml容量瓶中，加入精密称定的TET对照品10 mg，溶解平衡24 h，超声6 min，放冷，再加空白ME稀释至刻度，摇匀，精密吸取0.2 ml，置10 ml的容量瓶中，按供试品溶液的制备方法制成6份样品溶液，进样20 μl，测定峰面积，计算。
3 结果（见表1）
4 讨论
4.1 文献报道用甲醇-水体系作为流动相检测TET，我们选择甲醇∶水＝50∶50为流动相[6，7]，但TET出峰时间较迟，峰形宽。经试验摸索，以甲醇：水（85∶15）为流动相，TET保留时间为7.7 min，峰形较好。
4.2 TET在ODS-C18柱上有很强的吸附作用，且拖尾较严重，其原因可能是由于TET中碱性氮原子易与柱上未完全封尾的-OH产生氢键结合，使其难以洗脱，造成拖尾。加入三乙胺后可取代TET与柱中-OH氢键结合，减少TET在柱上的吸附，使其易于洗脱，从而改善色谱峰形，避免了拖尾现象[9]。
4.3 在处理供试品溶液和阴性对照品溶液时，有文献报道用甲醇或流动相破乳并溶解[10]，但在所选波长处检测有干扰峰，选择用无水乙醇处理能得到较好的效果。
4.4 本法简便、灵敏、准确，为TET微乳制剂的质量控制提供了依据。
参考文献：
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收稿日期：2008-07-21
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