【摘要】 目的 探讨大肠癌组织MMP-3表达及其临床意义。方法 用免疫组化SP法测定66例大肠癌组织及癌旁正常组织MMP-3表达，分析MMP-3表达与大肠癌临床病理因素之间的关系。结果 癌组织和癌旁正常组织MMP-3表达有显著性差异(P0．05）。结论 MMP-3表达同大肠癌生物学行为密切相关，可能与大肠癌的发生、发展及预后有关联。�
【关键词】 大肠肿瘤；间充质溶解素3；免疫组织化学��
Clinical significance of tissue MMP-3 expression in patients with colorectal carcinoma
ZHOU Wen-peng, FAN Qing-xia, FAN Kui-sheng, et al.
Department of Oncology, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, P．R．China.�
【Abstract】 Objective To, we investigate cancerous tissue MMP-3 expression in patients with colorectal carcinoma and evaluate its clinic significance. Methods Immunohistochemical method was used to detect tissue MMP-3 expression in 68 patients with colorectal carcinoma and its relationship with many pathologic parameters. Result Tissue MMP-3 expression was found to be significantly elevated in patients with colorectal carcinoma, compared with normal tissue (P0．05). Conclusions Tissue MMP-3 expression correlated significantly with biological behavior of colorectal carcinoma. the high expression of MMP-3 might be related with the occurrence and progress of colorectal cancer． �
【Key words】 Colorectal carcinoma; MMP-3；Immunohistochemistry
肿瘤浸润与转移是恶性肿瘤的主要生物学特征，是造成临床治疗失败和患者死亡的主要原因。而细胞外基质和基底膜是恶性肿瘤浸润与转移的重要组织屏障。MMP-3作为基质金属蛋白酶中的一员,能降解细胞外基质和基底膜中的许多组成部分,从而参与肿瘤的发生发展。因此，应用免疫组化法检测大肠癌患者癌组织MMP-3表达，并分析其与临床病理因素之间关系。�
1 材料与方法�
1．1 检测对象 大肠癌切除标本68例。男39例，女29例。年龄31～85岁，平均55岁。病例为浙江大学附属邵逸夫医院肿瘤外科，2002 年7月至2004年7月的住院患者。所有标本均经过病理证实。其中，结肠癌34例，直肠癌34 例。组织学类型：乳头状腺癌10例，管状腺癌50例，黏液腺癌8例。本研究将乳头状腺癌和高、中分化腺癌定为分化好型，将低分化及黏液腺癌定为分化差型。临床病理分期按TNM分期。全部病例术前均未接受化疗及放疗，所有组织均用10%福尔马林液固定,常规石蜡包埋。�
1．2 免疫组化 采用免疫组化SP法，第-抗体为Santa Cruz 公司生产的抗MMP-3单克隆抗体，免疫组化试剂盒购于迈新公司。具体步骤如下①4 μm厚石蜡切片常规脱蜡及水化，TBS缓冲液洗涤3次；②切片经3%H�2O�2溶液在室温下孵育15 min,TBS洗涤3次,经微波炉抗原修复15 min,取出室温冷却,TBS洗涤3次；③非免疫血清保护20 min；④鼠抗人MMP-3单克隆抗体(浓度1：50)孵育60 min后放入4℃冰箱过夜；⑤TBS洗涤3次，羊抗鼠IgG血清孵育20 min,TBS洗涤3次；⑥蛋白过养化酶试剂孵育10 min,TBS洗涤3次；⑦0．04%DAB显色；⑧流水洗涤；⑨苏木素复染分化，常规脱水，透明封固。用TBS替代第一抗体作为空白对照。阳性标准：阳性染色为胞膜和胞浆有棕黄色颗粒沉着。根据细胞浆的染色程度及染色细胞百分率进行评分：基本不着色者为0分，着色淡者为1分。着色深者为2分；着色细胞占计数细胞百分率50％为3分．将每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得分各自相乘，为其最后得分。O～1分为阴性(-)、2～3分为阳性(+)、4分及以上为强阳性(++)。�
1．3 统计学方法 应用SPSS11．0软件对所得数据进行配对t检验并行统计分析。�
2 结果�
2．1 组织MMP-3 表达情况 正常组织MMP-3表达较弱，阳性率低；癌组织MMP-3以胞膜和胞浆表达为主，多呈弥漫分布，表达较强，2者间差异有显著性（P 3 讨论�
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)家族是一类依赖锌离子的内肽酶,绝大多数MMP以无活性的酶原形式分泌至胞外。MMP的活化过程是在其N 末端前肽区去掉大约80个氨基酸,使半胱氨酸与Zn离子分离,从而暴露Zn离子活性中心,使水分子能与Zn离子相互反应。而已活化的MMP则可进一步水解活化其他的酶原MMP,形成瀑布效应[1]。MMPs可以降解基底膜Ⅳ型胶原、V型胶原、层黏连蛋白等成分，破坏基底膜的完整性，这些作用为肿瘤的生长、局部侵袭乃至远处转移创造了有利的条件[2],因此在组织学上,基底膜完整性的破坏被认为是恶性肿瘤侵袭开始的一个标志[3]。MMP-3作为基质金属蛋白酶中的一员,能降解细胞外基质和基底膜中的许多组成部分,从而参与肿瘤的发生发展 [4]。本研究显示，大肠癌患者癌组织MMP-3表达强度明显高于正常组织，而且随着大肠癌临床病理分期的升高而明显上升,呈显著正相关。组织MMP-3的表达与血管侵犯、淋巴结转移和肝脏转移也呈显著正相关，提示MMP-3参与大肠癌的浸润和转移。这与Islekel等[5]的研究报道类似。 研究表明MMP-3除参与降解细胞外基质和基底膜外,MMP-3还通过激活其它的MMPs[3] 、调节E-钙黏蛋白[6]及调节凋亡[7]等作用而参与肿瘤的发生与发展。 由于MMP-3的表达与肿瘤生长密切相关, Monvoisin等 [8]用抗MMP-3抗体作用于肝癌细胞后发现, 肿瘤细胞侵润能力被抑制。Mercapide等[9]用基质金属蛋白酶抑制剂GM6001作用于肿瘤细胞后发现,MMP-3分泌减少, 肿瘤细胞侵润和转移能力明显减弱。针对MMPs的特异性抑制剂正在研究中，希望在不久的将来能运用于人类的肿瘤治疗。因此，免疫组化分析MMP-3在大肠癌中的表达为使用广谱或选择性MMP抑制剂治疗奠定了理论基础，提示MMP-3可能成为抗肿瘤治疗的一个新靶点。�
参考文献
［1］ Murphy G, Stanton H, Cowell S,et al. Mechanismsfor promatrix metalloproteinase activation.APMIS,1999,107(1):38-41.�
［2］ Jadhav U, Chigurupati S, Lakkas S, et al.Inhibition of matrix metalloproteinase-9 reduces in vitro invasion and angiogenesis in human microvascular endothelial cells.Int J Oncol,2004,25(5):1407 -1414.�
［3］ Themsche C, Potworowski E, Pierre S, et al. Stromelysin-1 (MMP-3) is inducible in T lymphoma cells and accelerates the growth of lymphoid tumors in vivo .Biochem Biophys Res Commun,2004,315(4):884-891.�
［4］ Jin X, Yagi M, Akiyama N, et al. Matriptase activates stromelysin (MMP-3) and promotes tumor growth and angiogenesis.Cancer Sci,2006 ,97(12):1327-1334. �
［5］ Islekel H, Oktay G, Terzi C, et al. Matrix metalloproteinase-9,-3 and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 in colorectal cancer: relationship to clinicopathological variables.Cell Biochem Funct,2006,13,Epub ahead of print.�
［6］ Nawrocki-Raby B, Gilles C, Polette M, et al. E-Cadherin mediates MMP down-regulation in highly invasive bronchial tumor cells . Am J Pathol, 2003 , 163(2):653-661. �
［7］ Si-Tayeb K, Monvoisin A, Mazzocco C, et al. Matrix metalloproteinase 3 is present in the cell nucleus and is involved in apoptosis.Am J Pathol, 2006,169(4):1390-1340.�
［8］ Monvoisin A, Bisson C, Si-Tayeb K, et al. Involvement of matrix metalloproteinase type-3 in hepatocyte growthfactor-induced invasion of human hepatocellular carcinoma cells . Int J Cancer,2002,97(2):157-162.�
［9］ Mercapide J,Lopez R, Castresana J, et al. Stromelysin-1/matrix metalloproteinase-3 (MMP-3) expression accounts forinvasive properties of human astrocytoma cell lines. Int J Cancer,2003,106(5):676-682.�