摘 要 目的:对鹰嘴豆4个提取部位对正常和高血糖模型小鼠血糖值的影响进行研究,并筛选出其中的有效部位,为进一步研究奠定基础｡方法:分别对正常小鼠､肾上腺素高血糖小鼠和四氧嘧啶糖尿病小鼠灌胃4个提取部位,一周后测定血糖值和肝糖原含量｡结果:鹰嘴豆提取部位Ⅲ可显著性降低正常小鼠和肾上腺素高血糖小鼠的血糖值,对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖无作用｡结论:鹰嘴豆提取部位Ⅲ在降血糖筛选实验中作用最显著,故将其做为有效部位进行进一步研究｡
关键词:鹰嘴豆 有效部位 血糖 肝糖原
维药鹰嘴豆(Cicer arietinum L.)作为新疆药用植物已有2500多年历史,已收载于《中华人民共和国卫生部药品标准-维吾尔药分册》和《维吾尔药志》[1]｡其主要化学成分为:蛋白质､脂肪油､淀粉等[2]｡在维药中被广泛用于治疗糖尿病､高脂血症等疾病｡新疆民族医院及民间用鹰嘴豆粉来治疗糖尿病､阳萎､肾虚､营养不良,也有一些鹰嘴豆的保健食品｡为进一步研究其药用价值,本实验从不同提取部位着手对鹰嘴豆降糖的有效部位进行了筛选,选用正常和高血糖小鼠模型,从整体水平进行降糖作用的药效学比较,初步确定了鹰嘴豆降血糖的有效部位,为进一步研究鹰嘴豆的有效成分,阐明其降糖机制提供参考｡
1 实验材料
1.1 实验药物:市售奇台产鹰嘴豆,鉴定人是新疆药物研究所张彦福研究员;用系统溶剂分离法,从鹰嘴豆中提取分离到提取部位Ⅰ､Ⅱ､Ⅲ､和Ⅳ,进行降糖作用试验;消渴丸,广州中一药业有限公司产品,批号500268号｡
1.2 实验动物:清洁级ICR小鼠,雄性,18～22 g之间,购自新疆医学实验动物中心(SCXK(新)2003-0002)｡
1.3 主要试剂:四氧嘧啶(Alloxan)购自北京拜尔迪生物公司,批号sigmaA7413号， 临用时以生理盐水配成2%水溶液,使用剂量为200 mg・kg-1;盐酸肾上腺素 天津金耀氨基酸有限公司产品,批号0607221号,临用时用生理盐水配成1%水溶液,使用剂量为300μg・kg-1;葡萄糖试剂盒,中生北控生物科技股份有限公司产品,批号060551号;肝糖原试剂盒,南京建成生物工程研究所产品,批号20070905号｡其余所用试剂均为国产分析纯｡
1.4 主要仪器:550型微孔板判断仪(酶标仪) 江苏中大仪器厂产品;BS110S电子分析天平,北京塞多利斯天平有限公司产品;TGL-16C型离心机,上海安亭科学仪器制造厂;UV-2501紫外分光光度计,日本导津｡
2 方法与结果
2.1 鹰嘴豆4个提取部位不同剂量对正常ICR小鼠空腹血糖的影响
取健康雄性ICR小鼠100只,20±2g,适应性喂养1d,控制每日明暗时间各12h,室温保持在18～28℃｡随机分成10组,每组10只｡空白对照组,每日1%CMC-Na溶液灌胃;阳性对照组,每日消渴丸灌胃;提取部位Ⅰ､Ⅱ､Ⅲ､和Ⅳ提取物筛选组,均按原生药20g・kg-1､40g・kg-1的低､高剂量折算灌胃给药[3],按体重随时调整用药剂量,连续灌胃7d｡分别于第7d,禁食5h后给药,给药后2h测空腹血糖｡各给药组血糖值与空白组进行t检验,结果见表1｡
由表1可见鹰嘴豆提取部位Ⅱ､Ⅲ不同剂量时均可降低正常雄性ICR小鼠空腹血糖,但提取部位Ⅱ低剂量时较空白对照组无显著性差异,高剂量时较空白对照组有显著性差异;提取部位Ⅲ低剂量时较空白对照组有显著性差异,高剂量时较空白对照组有极显著性差异｡其它组与空白对照组比较无显著性差异｡综上可见鹰嘴豆提取部位Ⅲ可明显降低正常雄性ICR小鼠空腹血糖,并且存在一定的量效关系｡
2.2 鹰嘴豆4个提取部位对肾上腺素高血糖小鼠空腹血糖及肝糖原的影响[4]
取健康雄性ICR小鼠70只,20±2g,同上处理后随机分成7组,每组10只｡空白对照组及动模组,每日1%CMC-Na溶液灌胃;阳性对照组,每日消渴丸灌胃;提取部位Ⅰ､Ⅱ､Ⅲ､和Ⅳ提取物筛选组,均按原生药40g・kg-1的高剂量折算灌胃给药,按体重随时调整用药剂量,连续灌胃7d｡末次给药前禁食12h,给药后除空白对照组腹腔注射等体积的灭菌生理盐水外,其余各组均按300μg・kg-1腹腔注射肾上腺素,30min后摘眼球取血｡处死实验动物后,取出肝脏｡分别在空白对照组与动模组､给药组与动模组间进行血糖值及肝糖原的t检验,结果见表2｡
由表2可见给正常ICR小鼠腹腔注射肾上腺素后较空白对照组,小鼠血糖显著升高,肝糖原显著降低,为肾上腺素高血糖小鼠模型｡鹰嘴豆提取部位Ⅰ､Ⅱ､Ⅲ大剂量时均可明显降低肾上腺素高血糖小鼠空腹血糖,其中提取部位Ⅱ､Ⅲ作用极显著,鹰嘴豆提取部位Ⅲ､Ⅳ能显著改善小鼠肝糖原的低减､增加肝糖原含量｡
2.3 鹰嘴豆4个提取部位对四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖的影响[5][6]
健康雄性ICR小鼠85只， 20±2g,同上处理后,禁食（自由饮水）12h,按四氧嘧啶200mg・kg-1量左下腹腔快速注射四氧嘧啶生理盐水溶液， 于注射后3h,灌服高浓度(质量分数50%)的葡萄糖30g・kg-1｡并于实验第3d眼眶取血,测定空腹血糖值｡造模后血糖值高于11mmol・L-1的小鼠为糖尿病小鼠模型｡
剔除不合格小鼠,选取造模成功的小鼠60只分为6组,每组10只｡动模对照组,每日1%CMC-Na溶液灌胃;阳性对照组,每日消渴丸灌胃;鹰嘴豆提取部位Ⅰ､Ⅱ､Ⅲ､Ⅳ提取物筛选组,均按原生药40g・kg-1的高剂量折算灌胃给药,按体重随时调整用药剂量,连续灌胃7d｡于第7d,禁食5h后给药， 给药后2h测血糖｡各给药组血糖值分别与动模组及给药前血糖值进行t检验,结果见表3｡
由表3可见鹰嘴豆提取部位Ⅲ用药1周后， 血糖值与用药前成模小鼠血糖值相比显著降低,但随给药时间延长对四氧嘧啶糖尿病小鼠的降血糖作用渐减,持续用药达2周时对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的降糖作用消失｡
3 结论
糖尿病是一种胰岛素绝对或相对缺乏,或胰岛素抵抗所致的慢性病｡如果胰岛β细胞合成变异胰岛素或胰岛素原结构发生变化,不能被蛋白酶水解均可导致Ⅱ型糖尿病的发生;而如果β细胞遭到自身免疫反应或化学物质的破坏,细胞数显著减少,合成胰岛素很少或根本不能合成胰岛素,则会出现Ⅰ型糖尿病｡胰岛素循环过程中抗胰岛素的物质增加也可引起糖尿病,它们可以是胰岛素受体抗体或激素类物质等｡受体数量减少或受体与胰岛素亲和力降低以及受体的缺陷,均可引起胰岛素抵抗等,最终使β细胞逐渐衰竭,血浆胰岛素水平下降[7]｡因此,在胰岛素的产生､体内循环､对靶细胞作用这三个步骤中任一环节均可引起糖尿病｡
通过上述实验筛选出的提取部位Ⅲ可显著降低正常雄性ICR小鼠空腹血糖;可显著降低肾上腺素高血糖小鼠空腹血糖并改善小鼠肝糖原的低减､增加肝糖原含量;但对四氧嘧啶糖尿病小鼠无降糖作用;根据以上试验结果,我们认为鹰嘴豆提取部位Ⅲ是筛选后的降血糖有效部位｡由于四氧嘧啶糖尿病模型小鼠类似于Ⅰ型糖尿病模型,我们推测鹰嘴豆有效部位Ⅲ对Ⅰ型胰岛素依赖型糖尿病无治疗作用｡鹰嘴豆有效部位Ⅲ降糖的作用可能是通过促进外周组织和靶器官对糖的利用,通过对肾上腺素的拮抗作用而降低血糖,不排除其降糖机理与胰外途径,特别是增加肝糖原贮存､减少肝糖原分解相关;也不排除改善糖尿病小鼠肝内糖代谢紊乱,减少糖原分解､降低糖异生增强肝细胞合成糖原的功能， 从而降低血糖;也可能是通过延缓肠道对葡萄糖的吸收而降低血糖;不排除增加胰岛素的敏感性改善胰岛素抵抗的作用｡
参考文献
1､新疆维吾尔自治区卫生厅.维吾尔药材标准（1992年版，上册）[M].新疆：新疆科技卫生出版社，1992：406-407
2､郑卓杰.中国食用豆类学[M].北京：中国农业出版社，1995：265-267
3､侯水薇，王志勇，王厚冰等.鹰嘴豆对小鼠血糖及血脂的影响[J].新疆师范大学学报，2005，24（4）：62-64
4､赵帜平，何正祥，刘祚军等.丹皮多糖-2b对肾上腺素模型小鼠降血糖作用研究.生物学杂志[J]，2003，20（5）：18-20
5､陈奇.中药药理实验方法学[M].贵阳人民出版社，1996：356-357
6､徐叔云，卞如濂，等.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2002：1516-1520
7､韩莹.抗糖尿病药物的合成､降血糖活性及构效关系研究[D].药科大学博士学位论文,2002，5：8-13
(收稿日期:2007.12.1)