[摘要] 目的 探讨黄芪对大鼠慢性胰腺炎的治疗作用。方法 采用光度酶联免疫分析法(ELISA)及比色法检测胰腺正常组、对照组、干预组中的层粘连蛋白(LN)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性进行比较分析,同时对胰腺组织进行HE染色,观察病理形态学改变。结果 胰腺纤维化组血清中LN的含量明显增高,SOD的活性降低,干预组中LN含量较对照组降低,SOD活性较对照组升高。结论 黄芪注射液有改善大鼠胰腺纤维化的作用。
[关键词] 黄芪注射液; 胰腺纤维化; 层粘连蛋白; 超氧化物歧化酶
[中图分类号] R255.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)03-03-03
Therapeutic Effect of Astragalus Injection on Chronic Pancreatitis
GUO Qiang ZHANG Bingtai LI Maolan REN Hui
Department of General Surgery,the Second Hospital of Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China
[Abstract] ObjectiveTo investigate the therapeutic effect of Astragalus injection on rat chronic pancreatitis. MethodsThe laminin(LN)level and the superoxide dismutase(SOD) activity were detected in normal pancreas group(pancreas fibrosis group),control group and intervention group by using enzyme immunoassay(ELISA) and colorimetric method,and the pancreatic tissue was stained by using HE and its pathological change was observed. ResultsThe serum LN level was significantly higher and the SOD activity was decreased in the pancreas fibrosis group. The serum LN level was lower and the SOD activity was higher in the intervention group compared with the control group. ConclusionAstragalus injection has the role in the improvement of rat pancreatic fibrosis.
[Key words]Astragalus injection; Pancreatic fibrosis;Laminin;Superoxide dismutase
慢性胰腺炎是由于胆道疾病或酒精中毒等因素导致的胰腺实质进行性损害和纤维化,常伴钙化、假性囊肿及胰岛细胞减少或萎缩。主要表现为腹痛、消瘦、营养不良、腹泻或脂肪痢,后期可出现腹部包块、黄疸和糖尿病等。其病理生理过程复杂,以胰腺内成纤维细胞和细胞外基质(ECM)在胰腺组织内过多沉积为其特征[1]。传统的胰腺纤维化指标是LN的含量升高及SOD活性降低。我们采用光度酶联免疫分析法(ELISA)检测胰腺正常组、对照组、黄芪注射液小剂量组、中剂量组、大剂量组中的LN的含量及SOD的活性进行比较分析,以初步探讨其对胰腺纤维化的治疗作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物
选用雄性Spraque-Dawley大鼠50只,清洁级,体重200～250g,由上海斯莱克实验动物有限公司提供,饲养于山西医科大学动物实验中心。
1.2 主要试剂与药物
三硝基苯磺酸(TNBS)为Sigma公司产品(批号:107K5008)。黄芪注射液购于成都地奥九泓制药厂。LN试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。SOD试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.3 方法
1.3.1 模型建立 SD大鼠随机方法等分成5组,每组10只,分别为正常组、模型正常组、低剂量黄芪干预组(400mg/kg)、中剂量黄芪干预组(800mg/kg)、大剂量黄芪干预组(1600mg/kg)。除正常组外,其余4组大鼠术前禁食12h,胺碘酮(100mg/kg体重)腹腔注射麻醉,沿腹白线做正中切口,夹闭胰胆管近肝门端,通过恒流泵向十二指肠乳头注射2%TNBS乙醇磷酸盐缓冲液0.4mL,1h注完,关闭恒流泵后维持压力10min,以防药物回流,手术过程严格无菌操作[2]。为防止大鼠脱水,每天皮下注射生理盐水2次,每次6mL,直至大鼠能自由饮水。术后禁食72h后给予常规饮食。于术后72h用不同剂量的黄芪肌肉注射至术后28d。
1.3.2 检测指标和方法 所有所有观察对象抽取静脉血,分离血清,置于-20℃低温冰箱中备用。实验前将血清置室温复溶,转离心,取上清液进行测定。采用光度酶联免疫分析法(ELISA)检测胰腺正常组、对照组、干预组中的LN的含量。SOD试剂盒采用黄嘌呤氧化酶法测其总活力。
1.4 统计学处理
实验数据应用SPSS11.0统计软件系统分析处理。各组间计量资料均采用(χ±s)表示。含量正常组和黄芪处理组的比较采用Dunnet t检验,各个黄芪处理组之间的比较采用LSD-t检验。
2 结果
2.1 胰腺组织病理学改变
对照组大鼠胰腺明显病理变化。模型组大鼠造模4周后,可见胰腺间质炎性细胞浸润,管周纤维组织增生,胰管增生扩张,管周及胰腺小叶间和小叶内纤维化伴炎症细胞浸润,局部腺体萎缩坏死,腺泡空泡样变。干预组较模型组纤维化程度明显减少。见图1、表1。将五组大鼠胰腺组织病理切片进行纤维化评分,发现模型组大鼠胰腺纤维化程度远远高于干预组,有显著差异。
2.2 胰腺血清中LN含量与SOD活性的变化
SD大鼠正常组与对照组比较,对照组发生明显的胰腺纤维化,LN的含量明显升高,SOD活性明显降低。黄芪干预组中胰腺纤维化程度减轻,小中大剂量组均使LN含量降低(P LN属结构性蛋白,存在于基底膜的透明层中,在胰腺纤维化时沉积于胰腺血窦,使胰腺血窦毛细血管化,增加胰腺窦阻力,使胰腺血清中LN含量增高[7],与胰腺纤维化密切相关。SOD是机体中抗氧自由基的关键酶类,对机体的氧化与抗氧化起着至关重要的作用,在胰腺中含量丰富,对胰腺抗氧自由基损伤有重要作用。
黄芪是扶正补气的中药,其主要成分是黄芪皂甙、黄芪多糖等,具有提高免疫功能,抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性,亦有报道黄芪有抗肝、肾、肺纤维化作用[8-9]。黄芪主要成份是黄芪总黄酮(TFA)、黄芪总皂甙(TPA)和黄芪总多糖(TSA)。有报道表明黄酮类物质抗氧化清除自由基的主要机理是酚轻基类基团在与过氧化物作用时,通过提供氢原子,发生氧化还原反应而发挥作用[10]。从Kitagawa等测定黄芪总皂甙的几种分子结构式可以看出,黄芪中的皂贰类成分为含有一个以上的酚轻基基团的多环状化合物,其结构与黄酮类化合物类似,黄芪中总黄酮和总皂甙类成分清除自由基,是其结构中的酚经基基团与自由基反应而发挥功效。我国学者刘星谐等认为黄芪总皂甙清除自由基作用的机理是由于含有以环黄芪醇为甙元的糖甙,这些糖甙与自由基发生反应,阻止了新的自由基生成,从而抑制机体氧化应激的作用,提高SOD活性抑制机体纤维化。
本实验通过研究不同浓度的黄芪注射液对大鼠慢性胰腺炎的干预,从而探讨黄芪注射液对慢性胰腺炎的治疗作用。大鼠胰腺组织病理形态学改变和胶原纤维染色分析结果均支持黄芪具有改善胰腺纤维化的作用。血清LN、SOD是反应胰腺纤维化的重要指标。大鼠慢性胰腺炎模型组中LN含量明显增高,SOD活性明显降低。分别用大、中、小三种剂量的黄芪对大鼠慢性胰腺模型进行治疗,经治疗后,三组均有疗效,均使LN含量降低,SOD活性升高。其中以大剂量组疗效最为明显,使LN含量、SOD活性最为接近正常水平。以上均进一步说明黄芪注射液可通过多途径延缓胰腺纤维化的发生,有较好的预防效果,临床应用能较好地防止胰腺纤维化的发生发展,对慢性胰腺炎有较好的治疗作用。
[参考文献]
[1] Bachem MG,Scheider E,Gross H et al. Identification,culture,and Characterization of pancreatic stellate cells in rats and humans[J]. Gastroente- rology,1998,115(2):421-432.
[2] 王兴鹏,龚自华,吴凯,等. 三硝基苯磺酸诱导大鼠慢性胰腺炎模型的建立[J]. 中华病理学杂志,2003,32(3):267-269.
[3] 何少武,胡先贵,金钢. 慢性胰腺炎与细胞外基质代谢失衡的关系[J].中华实验外科杂志,2004,21(3):323-324.
[4] 汪德清,沈文梅,田亚平,等. 黄芪活性提取成分对膜脂质过氧化损伤的防护作用[J]. 中国中药杂志,1996,21(12):746.
[5] 孙备. 膜荚黄芪根中的抗氧化成分[J]. 国外医学:中医中药分册,1998, 20(4):54.
[6] 展玉涛,刘宾,李定国,等. 大黄素抗肝纤维化的作用机制[J]. 中华肝脏病杂志,2004,12(4):245-246.
[7] Garcia2Ruiz I,Dela Torre P,Diaz T,et al. Sp1 and Sp3 transcription factors mediate malondialdehyde2 induced collagen alpha 1(I)gene expression in cultured hepatic stellate cells[J]. J Bio l Chem,2002,277:30551- 30558.
[8] Zhou X,Dai LL,Jia LP et al. Study on the inhibitive effect of Astragalus injection solution on hepatic fibrosis in rats[J]. Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi,2005,13(8):575-578.
[9] 杨映雪,陈建业,王亚. 黄芪总黄酮的抗氧化作用[J]. 川北医学院报,2007,6(22):606-608.
[10] 邓英辉,林琼真,于洁,等. 黄芪注射液改善肾间质纤维化的作用机制研究[J]. 中国中西医结合肾病杂志,2008,9(5):393-396.
(收稿日期:2009-11-05)