【摘要】 目的 探讨全反式维甲酸(alltrans retinoic acid,ATRA)对体外培养的胃癌BGC823细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法 不同浓度全反式维甲酸处理培养的胃癌BGC823细胞后,采用MTT法检测细胞的增殖活性,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用RTPCR检测细胞Survivin基因mRNA的变化。结果 全反式维甲酸对胃癌BGC823细胞的生长具有明显的抑制作用,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性(Pl000个细胞,以背景无颜色,细胞核着棕黄色者为阳性细胞。分别计数总细胞数量和凋亡细胞数量。按下面公式计算凋亡指数(AI),凋亡指数(AI)=(凋亡细胞数/总细胞数)×100%。
1.5 RTPCR检测Survivin基因mRNA表达的变化 采用Trizol抽提法提取1 μmol/L的全反式维甲酸分别作用0、24、48、72 h后的总RNA;逆转录合成cDNA。Survivin引物上游5’AGAACTGGCCCTTCTTGGA3’;下游5’AAGGAAAGCGCAACCGGACG3’,退火温度58 ℃,扩增片段长194 bp。βactin引物:上游5’ATGGCACCGTCAAGGCTGAG3’;下游5’GCAGTGATGGCATGGACTGT3’,扩增片段长379 bp。PCR反应操作均严格按照试剂盒说明进行,反应体系25 μl,扩增条件:94℃ 5 min;94℃ 30′,54℃ 30′,72℃ 60′,重复30个循环;72℃ 10 min。反应完成后取5 μl PCR产物加loading buffer混合后进行琼脂糖凝胶电泳。应用凝胶成像仪扫描成像,经图象分析处理后,按下面公式计算Survivin mRNA相对含量:Survivin mRNA相对含量=(Survivin mRNA光密度/βactin mRNA光密度)×100%。
1.6 统计学方法 采用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析和t检验,数据用x±s表示,检验水准χ2=0.05,P