【摘要】目的：建立尼扎替丁注射液细菌内毒素的检查方法。方法：用不同厂家、不同批号、不同灵敏度的鲎试剂对尼扎替丁注射液进行干扰实验。结果：用标示灵敏度为0.25 ＥＵ・ｍl-1的鲎试剂， 尼扎替丁注射液稀释2倍后，对细菌内毒素检查无干扰作用。结论：可以用细菌内毒素检查法取代尼扎替丁注射液的热原检查。
【关键词】鲎试剂；细菌内毒素；尼扎替丁注射液
文章编号：1009-5519（2008）17-2554-03 中图分类号：R9 文献标识码：A
尼扎替丁（Nizatidine）是继第一代西咪替丁、第二代雷尼替丁之后由美国礼来公司推出的第三代强效H2受体拮抗剂，可作用于胃黏膜壁细胞上的H2受体，竞争性地抑制组胺与H2受体的结合，从而抑制胃酸分泌。临床主要用于胃溃疡、十二指肠溃疡以及胃食管反流性疾病等的治疗，其疗效良好，不良反应小[1，2]。尼扎替丁注射液首次由英国礼来公司于1993年10月28日获准上市，商品名为爱希，规格为4 ml∶100 mg、6 ml∶150 mg、12 ml∶300 mg。考虑到目前国内尚未见尼扎替丁注射液开发上市，故立项研究开发了规格为4 ml∶100 mg的尼扎替丁注射液。本品为尼扎替丁的灭菌水溶液，参照中国药典2005年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法应用指导原则，对本品进行了细菌内毒素检查方法学的研究。现将结果报道如下。
1 药物、试剂与仪器
批号为：20070508、20070509、20070510尼扎替丁注射液由中南大学湘雅二医院药剂科和清华紫光古汉生物制药股份有限公司研制提供，其规格为：4 ml∶100 mg；鲎试剂(TAL)：批号20060908，规格：0.1 ml/支，灵敏度0.125 EU/ml；批号20061017，规格：0.1 ml/支，灵敏度0.25 EU/ml，均由湛江海洋生物制品厂生产；批号0608221，规格：0.1 ml/支，灵敏度0.25 EU/ml，由湛江安度斯生物有限公司生产；细菌内毒素国家工作标准品，160 EU/支，批号：2006-2，中国药品生物制品检定所提供；细菌内毒素检查用水(BET用水)：批号：20061005，2 ml/支，湛江海洋生物制品厂生产；批号：0607050，2 ml/支，湛江安度斯生物有限公司生产。2H-2型自动旋涡混合仪：天津药典标准仪器厂；电热恒温水浴箱：北京长源实验设备厂。
2 实验方法与结果
2.1 细菌内毒素限值(L)的确定：药品的细菌内毒素限值一般按如下公式确定：L＝K/M。其中L 为供试品的细菌内毒素限值；K为按规定的给药途经，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量；M为人用每公斤体重每小时接受尼扎替丁注射液的最大剂量。注射剂，K=5 EU/（kg・h）。参考尼扎替丁氯化钠注射液内毒素的检查方法，将尼扎替丁注射液4 ml(100 mg)首先用灭菌注射用水稀释成含尼扎替丁1 mg/ml的溶液备用。参考本品临床的用法用量可知，M=400 ml/（60kg・h）。因此L＝K/M= 5×60/400 =0.75 EU/ml。经计算所得的L值为理论值，基于本品为用临床常用输液稀释后再静脉滴注的制剂，且临床多为联合用药，经过试验验证，认为将L值定为小于0.5 EU/ml较为合理，这样留有一定的安全系数。
2.2 最小不干扰稀释倍数的测定：取湛江海洋生物制品厂生产的鲎试剂（灵敏度0.125 EU/ml）和细菌内毒素国家工作标准品(160 EU/ml )，将细菌内毒素国家标准品用BET水稀释至0.25 EU/ml，任取一批样品(批号：20070108) 首先用灭菌注射用水稀释成含尼扎替丁1 mg/ml的溶液作为原液后，再进行2倍及4倍的稀释，以此来测定本品的最小不干扰稀释倍数。结果见表1。
经过以上预试验，可知用0.125 EU/ml灵敏度的鲎试剂进行试验，原液、2倍及4倍稀释液，均无干扰，故本品最小不干扰稀释倍数为1。
2.3 鲎试剂灵敏度的复核：将细菌内毒素国家工作标准品用BET用水稀释成2λ、1λ、0.5λ、0.25λ系列浓度，按中国药典2000年版二部附录ⅪⅩF项下的有关规定进行操作，结果见干扰试验。
2.4 干扰试验
2.4.1 取湛江海洋生物制品厂生产的鲎试剂(0.25 EU/ml)和中检所提供的内毒素国家工作标准品(160 EU/支)，分别用BET水、2倍稀释液稀释细菌内毒素至2λ、1λ、0.5λ和0.25λ，依法操作。测定结果见表2。
结果计算与判断：Es或Et＝antilg[(X1＋X2＋X3＋X4)/4]，X1、X2、X3、X4为反应终点浓度的对数值(lg)。经计算，Es＝0.25 EU/ml，Es在0.125~0.5 EU/ml之间，表明该鲎试剂灵敏度符合规定；Et(20070508)＝0.297EU/ml、Et(20070509)＝0.354 EU/ml、Et(20070510)
＝0.354 EU/ml，均在0.5~2.0Es之间，即0.125~0.5 EU/ml之间，说明供试品在稀释倍数为2倍时不存在干扰。
2.4.2 取湛江安度斯生物有限公司的鲎试剂(0.25 EU/ml)和中检的细菌内毒素国家工作标准品(160 EU/支)，分别用BET水、2倍稀释液稀释细菌内毒素至2λ、1λ、0.5λ和0.25λ4个浓度， 依法操作， 测定结果见表3。
结果计算与判断：Es或Et＝antilg[(X1＋X2＋X3＋X4)/4]，X1、X2、X3、X4为反应终点浓度的对数值(lg)。经计算，Es＝0.25 EU/ml，Es在0.125~0.5 EU/ml之间，表明该鲎试剂灵敏度符合规定；Et(20070508)＝0.297EU/ml、Et(20070509)＝0.42 EU/ml、Et (20070510)
＝0.42 EU/ml，均在0.5~2.0 Es之间，即0.125~0.5 EU/ml之间，说明供试品在稀释倍数为2倍时不存在干扰。
2.5 样品的细菌内毒素检查：取湛江海洋生物制品厂生产的鲎试剂（灵敏度0.25 EU/ml）、湛江安度斯生物有限公司生产的鲎试剂(灵敏度0.25 EU/ml)以及中检所提供的细菌内毒素国家工作标准品(160 EU/ml)，将样品首先用灭菌注射用水稀释成含尼扎替丁1 mg/ml的溶液后，再稀释2倍，依法进行细菌内毒素检查。测定结果见表4。上述试验结果表明：采用两个厂家的鲎试剂，所检验的三批样品均呈阴性，且样品阳性管无干扰。
3 结论
在本试验条件下，根据预试结果可知，样品加水稀释成每1 ml中含尼扎替丁1 mg的溶液后的稀释溶液、在此基础上再2倍及4倍稀释液均无干扰。干扰试验进一步证明1 mg/ml样品在稀释倍数为2倍时，对细菌内毒素检查无干扰。因此本品可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法。且建议将尼扎替丁注射液的细菌内毒素限值规定为 ：取本品，加水稀释成每1 ml中含尼扎替丁1 mg的溶液后，依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅺ E），稀释液中含内毒素量应小于0.5 EU/ml。
参考文献：
[1] 南天平，郭广炎，潘伯荣.新型H2受体阻滞剂尼扎替丁[M].国外医药－合成药、生化药、制剂分册，1990，11（3）：162.
[2] 张中一.尼扎替丁的药理与临床应用[J].中国医院药学杂志，1992，12(6)：251.
收稿日期：2008-04-18