【摘要】 目的 建立HPLC测定连翘败毒片中大黄素、大黄酚含量的方法。方法 选用C�18(250×4.6 mm、5 μm)色谱柱；甲醇0.1%磷酸(82：18)为流动相；检测波长为254 nm；流速1.0 ml/min；柱温 40℃；进样量为5 μl。结果 大黄素与大黄酚在0.0288~0.1440 μg与0.0450~0.2260 μg范围内分别具有良好的线性关系。结论 本法简便、快速、准确，适用于连翘败毒片中大黄素、大黄酚的含量测定。
【关键词】 高效液相色谱法;连翘败毒片;大黄素;大黄酚
HPLC determination of Lianqiao Baidu tablets emodin and chrysophanol
JIA Guilong,SHI Chunying,CHE Xuan.
Department of Phormacy Hospital of Dongfeng County,Jilin 136300,China
【Abstract】 Objective To establish the HPLC determination of Lianqiao Baidu tablets emodin and chrysophanol method.Methods Selection of C�18(250 × 4.6 mm,5 μ m)chromatography,methanol0.1%phosphoric acid(82:18)for the mobile phase, detection wavelength for 254 nm; velocity 1.0 ml/min,column temperature 40℃,sampling quantity was 5 μl.Results Emodin and chrysophanol 0.0288~0.1440μg and 0.0450~0.2260 μg range had good linear relationship.Conclusion This is simple,fast,accurate,suitable for in Lianqiao Baidu emodin and chrysophanol determination.
【Key words】 HPLC； Lianqiao Baidu tablet； Chrysophanol; Emodin
本品是由桔梗、白芷、大黄等十八味药材组成的复方制剂，大黄为方中主药，与该产品功能主治密切相关，其测定方法成熟，准确，故以大黄素、大黄酚为指标，建立了其含量测定方法。
1 方法
1.1 仪器与试药 岛津LC2010A高效液相色谱仪；试剂均为色谱纯及分析纯；大黄素、大黄酚(购自中国药品生物制品检定所，批号0756200110、0796200003)。
1.2 测定波长选择
取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1 ml含10 μg的溶液，在200~400 nm波长处进行扫描，结果大黄素在289 nm、254 nm、220 nm波长处有最大吸收，大黄酚在287 nm、254 nm、225 nm波长处有最大吸收。参照2000年版药典一部大黄药材含量测定项下，选择254 nm作为测定波长。
1.3 系统适用性试验 色谱条件色谱柱为VPC�18柱(250×4.6 mm、5 μl)；流动相甲醇0.1%磷酸(82：18)，流速1.0 ml/min，柱温40℃，检测波长254 nm，根据上述色谱条件，测定供试品及对照品。计算理论塔板数以大黄素峰计算：N=4058。
1.4 对照品溶液的制备 精密称取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1 ml分别含14μg及25μg的溶液，即得。
1.5 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，精密称取1.5 g，置250 ml锥形瓶中，精密加乙醇50 ml，称定重量，回流提取1 h，放冷，加乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液10 ml，置锥形并中，蒸干，加入30%乙醇盐酸(10：1)的溶液15 ml，加热回流1 h，立即冷却，用氯仿振摇提取4次，每次15 ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 m1量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2 方法学考察
2.1 线性关系考察 取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1 ml含14.4 μg及22.6 μg的溶液，精密吸取上述溶液2、4、6、8、10 μl，分别注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线。
测得回归方程为Y=3980343.75X7714.1(大黄素)，R=0.9999，Y=5395037.611X5986.9(大黄酚)，R=0.9999，表明大黄素与大黄酚在0.0288~0.1440 μg与0.045~0.2260 μg范围内分别具有良好的线性关系。
2.2 空白试验
按原处方工艺制成不含大黄的阴性对照样品，按方法测定，结果阴性对照色谱中，在与大黄素、大黄酚相应保留时间处，无干扰峰出现。
2.3 稳定性试验 取同一供试品溶液5 μl，分别在0 h、6 h、8 h、12 h照方法测定，按大黄素、大黄酚峰面积计，结果未发生明显变化，表明本品在12 h内基本稳定。
2.4 精密度试验 取同一供试品溶液5 μl，连续进样5次，测得峰面积结果为：大黄素RSD0.34%、大黄酚RSD0.38%。结果表明，仪器的精密性良好。
2.5 重现性试验 取同一供试品5份，依法独立测定，测定含量结果为：大黄素RSD0.38%、大黄酚RSD1.07%、总和RSD0.98%。结果表明本品重现性良好。
2.6 回收率试验 取经同法测定的已知含量的样品五份，每份0.75 g，精密称定，精密加入大黄素、大黄酚对照品适量，依法测定，计算回收率，测定回收率结果为：大黄素平均回收率为99.44%、RSD=0.44%，大黄酚平均回收率为99.59%、RSD=0.93%。结果表明，本法回收率较好，准确度较高。
3 样品测定结果
按上述方法测定3批样品，结果见表1。
4 讨论
4.1 测定波长的选择 分别取大黄素和大黄酚对照品溶液在200~400 nm波长范围内扫描，结果大黄素在220 nm、254 nm、289 nm，大黄酚在225 nm、254 nm、287 nm、波长处均有最大吸收，两者均在254 nm波长处吸收最大，灵敏度高，可同时测定大黄素和大黄酚的含量，故选择测定波长为254 nm。
4.2 提取方法的选择 分别对样品进行了甲醇加热回流提取、冷浸 1 h、超声处理 1 h等摸索，结果发现，冷浸及超声处理均未能使大黄素及大黄酚提取完全，加热回流的提取效果最好，故选择提取方法为加热回流。
参 考 文 献
［1］ 曹红，刘云.高效液相色谱法测定金薏尿石颗粒剂及大黄药材中大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚和芦荟大黄素的含量.药物分析杂志，1998，18(1)：3.
［2］ 唐刚，王义明.高效液相色谱法测定洁脉冲剂中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量.药物分析杂志，1999，19(5)：340 .
［3］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典.一部,2000.