（广西肿瘤防治研究所药剂科 广西 南宁 530021）�� 【摘要】 目的：建立RP-HPLC法对祛瘀散结胶囊中齐墩果酸的含量测定。方法:采用Platisil ODS柱（250mm ×5.0mm，5μm），流动相为甲醇-0.4%磷酸（90:10v/v），流速1.0mL?min-1；检测波长210nm，柱温40℃。结果：齐墩果酸在0.175~1.225ug范围内线性关系良好，得回归方程：y=3.46+7.24C（r=0.999 4，n=7），最低检测质量浓度为0.175ug，祛瘀散结胶囊中齐墩果酸的含量为266.1716ug/g～274.2573ug/g。结论：该方法具有操作简便、方法可靠、结果准确，稳定性好的特点，可用于祛瘀散结胶囊中齐墩果酸的含量测定及质量控制。�
【关键词】 RP-HPLC；祛瘀散结胶囊；含量测定；齐墩果酸�
【中图分类号】 R284.1
【文献标识码】 A【文章编号】1044-5511(2011)09-0008-02��
祛瘀散结胶囊（抑瘤宝、块结消）由白花蛇舌草、山慈菇、三七、枳壳等多种中药制成的胶囊剂。具有祛瘀消肿，散结止痛的功效；用于瘀血阴�所致的乳腺胀痛，乳癖，乳腺增生病。据文献报道[1]：祛瘀散结胶囊能有效地抑制实验性小鼠乳腺小叶增生；临床研究表明祛瘀散结胶囊治疗乳腺增生病的总有效率为72.7％，同时可提高机体细胞免疫功能。对S180肉瘤的活性有抑制作用，实验证实：治疗组的抑瘤率分别为25.1%、62.3%和47.2%，环磷酰胺治疗组的抑瘤率为76.4%，接近环磷酰胺的抑瘤率[2]。 治疗乳腺增生较乳核散结片疗效好，两组比较有统计学意义(P＜0.05)。能有效地抑制实验性小鼠乳腺小叶增生[3]。对卵巢囊肿和子宫肌瘤也有较好的疗效[4]。白花蛇舌草为茜草科耳草属植物白花蛇舌草（Hedyodis diffusa willd）的干燥全草，近年来大量研究表明白花蛇舌草对多种癌症如宫颈癌、胃癌、肝癌等均有明显的治疗作用。白花蛇舌草有较为复杂的化学成分，含有多糖、三帖酸、黄酮类、蒽醌类等多种化合物。齐墩果酸和熊果酸是其含有的两个主要有效成分，齐墩果酸具有较强的抗菌消炎作用，同时还具有保护肝脏、利水渗湿等功效。熊果酸对多种恶性肿瘤细胞有抑制其生长的作用，对诱癌致癌物也有一定的抵抗作用，除此以外还具有一些其他的更广泛的生物学效应[5]。据文献报道[6、7]祛瘀散结胶囊的质量标准是采用人参皂苷，未见有测定齐墩果酸含量的有关报道。在参考有关文献[8]的基础上，建立了反相高效液相色谱法测定祛瘀散结胶囊中齐墩果酸含量的方法，本法准确、简便、快速，可作为祛瘀散结胶囊的质量控制指标。�
1 仪器与试剂�
岛津LC-10AVP高效液相色谱仪、SPD-10AVP紫外外-可见检测器、WML-2010色谱工作站，甲醇（高效液相色谱淋洗剂；上海国药集团化学试剂有限公司）、冰醋酸为分析纯，双蒸水（自制）。�
齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0709-9808）；祛瘀散结胶囊为广西××制药有限公司产品（批号：090620、090906、091102）。�
2 方法与结果�
2.1 色谱条件 Platisil ODS柱（250mm ×5.0mm，5μm），以甲醇-0.4%磷酸（90:10V/V）为流动相，流速1.0mL?min-1；检测波长210nm，柱温40℃。结果见图1。�
2.2 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品10.5mg，置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（0.21μg•L -1）。。�
2.3 供试品溶液的制备 取祛瘀散结胶囊内容物，研磨，精密称取3.0g至100mL具塞三角烧瓶中，加甲醇30.0mL，超声提取40min，取出，放至室温，用甲醇补足减失的质量，用定量滤纸过滤，取续滤液1.0mL，离心15min(15 000r/min)，上清液即为供试品溶液。�
2.4 阴性干扰实验 按处方比例取处方中除白花蛇舌草以外的药材，制备缺少白花蛇舌草的阴性样品，按2.3项下方法制备阴性对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照品溶液及供试品溶液各15.0μL，注入到高效液相色谱仪中。结果可见，在阴性对照品溶液色谱图中与对照品溶液色谱图相应处无吸收峰，在供试品溶液色谱图中齐墩果酸的峰与其他成分峰的基本达到基线分离（图1）。 A:对照品溶液;B:供试品溶液;C:阴性对照品溶液 ;D:标准曲线图�
�
A.齐墩果酸HPL色谱图 B.样品HPLC色谱图 �
�
C.缺白花蛇舌草HPLC色谱图 D.齐墩果酸标准曲线图�
2.5 标准曲线考察 精密吸取齐墩果酸对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0、17.5μL，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=3.4�6+7.2�4C（r=0.999 4，n=7），结果表明，齐墩果酸在0.175~1.225ug的线性范围线性关系良好，最低检出限为0.175ug。�
2.6 精密度实验 取同一对照品溶液，分别精密吸取１０.０μL，注入到高效液相色谱仪中，进样6次。结果齐墩果酸峰面积的RSD为1.67%，提示所使用仪器的精密度良好。�
2.7 稳定性实验 取同一供试品溶液，每隔２h进样1次，连续６次，RSD为１.８０%，表明供试品溶液在１２h 内稳定性良好。�
2.8 重现性实验 精密称取同一批样品６份，按供试品实验方法进样测定，结果RSD为1.14%，提示本方法重现性良好.�
2.9 回收率实验 取已知齐墩果酸含量为272.9716ug/g的样品适量，研磨，精密称取0.30g，共9份，分别加入标准品溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL，按2.3项下方法进行提取，进样测定，计算回收率。结果示平均回收率为95.65%，RSD值为1.57%。见表1。�
表1 齐墩果酸加样回收率�
�
2.10样品含量测定 分别精密称取经研磨的不同批号（090620、090906、091102）的祛瘀散结胶囊内容物共9份（每一批号3份），按“2.3”项下制备，各取17.5μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。含量测定结果见表2。�
表2 祛瘀散结胶囊中齐墩果酸的测定结果（n=3）�
�
3 讨论�
祛瘀散结胶囊是以中药经科学组方，现代制药工艺制备的复方胶囊制剂，其质量标准采用HPLC测定人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量的方法[6、7]：该方法依据2010版《中国药典》三七含量测定方法，以HPLC测定其人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量[8]。但这只是该制剂的质量控制方法之一。且祛瘀散结胶囊为复方制剂，成分复杂，测定人参皂苷Rg1的含量，测定过程采用了正丁醇提取，氨水洗涤，大孔吸附树脂柱吸附的方法除去干扰物质等步骤，较繁复[6]。由于祛瘀散结胶囊的处方白花蛇舌草为君药，在参考相关文献的基础上[8]，本文建立一种简便、快速、可靠的用RP-HPLC法测定该制剂中齐墩果酸含量。�
该方法直接取祛瘀散结胶囊内容物，经研磨，精密称取一定量，加入甲醇，超声提取40min，精密取续滤液1.0mL，离心15min(15 000r/min)，上清液即可进样测定，齐墩果酸的分离度均大于1.5，完全达到药典的要求。�
经上述RP-HPLC条件及方法的测定，祛瘀散结胶囊每克含齐墩果酸在266.1716～274.2573ug/g之间。 �
本文建立的测定齐墩果酸含量方法，操作简单，方法稳定，可操作性强，可考虑替代原有的质量控制标准或同时使用。��
参考文献�
[1] 匡志鹏，刘剑勇，张传珉等. 块结消胶囊治疗乳腺增生病的实验和临床应用研究[J]. 广西中医学院学报，2001,18(1) ：9~11�
[2] 张传珉，覃源才，黄仁彬等. 自拟抑瘤宝胶囊对小鼠移植性肿瘤的影响[J]. 广西医学 2003,25(5)：716~717�
[3] 张传珉 覃源才 全达芳等. 抑瘤宝胶囊治疗乳腺增生病280例观察 [J]. 实用中医药杂志 2002，18(3) ：12~13�
[4] 匡志鹏 覃源才 黄万珠等. 块结消胶囊对卵巢囊肿、子宫肌瘤的疗效观察[J]. 广西医学 2001，23(3) ：436~437�
[5] 郑茂，范博，丁红，等.高效液相色谱法测定不同产地白花蛇舌草中齐墩果酸和熊果酸的含量[J].中国药物与临床 2010，10（3）：261-263�
[6] 江维克 周涛. HPLC同时测定祛瘀散结胶囊中人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量[J]. 中成药 2007，29(4) ：534~536�
[7] 涂波 王丽 李春馨. HPLC法测定祛瘀散结胶囊中人参皂苷Rg1和Rb1的含量[J]. 实验科学与技术 2007，5(3)： 50~52，74�
[8] 王林凤，杨红侠. HPLC测定潮安颗粒中齐墩果酸的含量[J]. 现代中医药，2007，27（2）：64~65