【摘要】 目的 建立HPLC测定净石灵片中淫羊藿苷的含量的方法。方法 选用C�18(Φ4.6×250 mm，5μ)色谱柱；流动相：乙腈水(30：70)；流速：1.0 ml/min；检测波长为270 nm。结果 淫羊藿苷进样量在0.3224~1.6120 μg范围内，峰面积值与进样量呈良好的线性关系。结论 本法虽然有些耗时，但测定结果准确，适用于净石灵片中淫羊藿苷含量的测定。
【关键词】 高效液相色谱法;净石灵片;淫羊藿苷
HPLC Determination of jing shi ling tablet of icariin in
LI Yinglian，JIA Guilong，CHE Xuan.
Department of Phormacy Hospital of Dongfeng County,Jilin 136300,China
【Abstract】 Objective HPLC determination ofjing shi lingtablet of icariin in.Methods C 18(4.6 × Φ 250 mm,5 μ)chromatography,mobile phase,acetonitrilewater(30:70), velocity:1.0 ml/min, detection wavelength for 270 nm.Results Icariin injection volume in 0.3224~1.6120 μg range,peak area and sampling rate was good linear relationship.Conclusion Although some of this timeconsuming,but the determination of results in a jing shi ling tablet of icariin.
【Key words】 HPLC; Jing shi ling tablet; Icariin
本品是由广金钱草、黄芪、淫羊藿、茯苓等十七味药材组成，主治症为肾虚引起的石淋、砂淋，淫羊藿为方中主药，起着至关重要的作用，其含量的多少关系着药品的疗效，故本品采用测定淫羊藿苷的含量以控制药品的质量。
1 方法
1.1 仪器与试药 岛津LC10A高效液相色谱仪(日本)；SPD10A检测器；淫羊藿苷对照品，(批号：07399709)，购自中国药品生物制品检定所；乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
1.2 色谱条件的选择 色谱柱：KromonsilC�18(Φ4.6×250 mm，5μ)；流动相：乙腈水(30：70)；流速：1.0 ml/min；检测波长为270 nm。
在选定条件下淫羊藿苷和样品中其他组分可基线分离。按淫羊藿苷峰计算，理论板数(N)为14000以上，参考药典中的有关规定，理论板数按淫羊藿苷峰计算，应不低于3000。测定波长的选择：取淫羊藿苷对照品加甲醇溶解并配制成适宜浓度的溶液，在UV2401PC紫外可见分光光度计上，于190~400 nm有最大吸收。参考《中国药典》中淫羊藿苷测定波长，故选择检测波长为270 nm。
1.3 对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.1 mg的溶液，即得。
1.4 供试品溶液的制备 取本品20片，除去包衣，研细，取1 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流5 h，提取液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20 ml，弃去乙醚液，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20 ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加水5 ml使溶解，通过已处理好的D101大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm，长15 cm)，用水70 ml洗脱，弃去水液，再用70%乙醇180 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
1.5 测定法 分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2 方法学考察
2.1 线性关系考察 标准曲线、回归方程、相关系数、线性范围精密吸取对照品溶液(80.6 μg/ml)4 μl、8 μl、12 μl、16 μl、20 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量(μg)为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=(3.868e+0.2)X+(23066.658)，相关系数r=0.9998。结果表明，淫羊藿苷进样量在0.3224~1.6120 μg范围内，峰面积值与进样量呈良好的线性关系，见附图1(图略)。
2.2 空白试验 取不含淫羊藿的阴性对照品与供试品溶液同法制备阴性对照品溶液。照高效液相色谱法试验，阴性对照色谱中，在与淫羊藿苷对照品相应的保留时间处无色谱峰，表明阴性对照无干扰，见附图2(图略)。
2.3 稳定性试验 取同一供试品溶液，照质量标准草案方法分别于0、7、12、17、24 h进样测定淫羊藿苷峰面积积分值，结果分别为406714.0、403525.0、405710.0、401493.0、407532.0，平均值为404994.8，RSD=0.61%。试验结果表明淫羊藿苷含量在24 h内稳定性好。
2.4 精密度试验 取同一供试品溶液，照质量标准方法连续进样5次，测定峰面积，进行精密度试验，结果测得淫羊藿苷峰面积积分值分别为：406714.0、401132.0、409738.0、403317.0、405291.0。平均值为405238.4，RSD=0.81%。结果表明：精密度良好。
2.5 重现性试验 取同一批号供试品依法独立测定5次，测定结果为平均值X=1.89 mg/g，RSD=1.2%。结果表明：重现性良好。
2.6 回收率试验 精密称取已知含量的样品(含量0.89 mg/片)五份，每份约1.5 g，精密称定，分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液(0.42 mg/ml)5 ml，照质量标准草案方法测定含量，计算加样回收率，测定结果为:加样回收率平均值X=98.62%，RSD=0.8%。结果表明:回收率较高。
3 样品测定
依法测定样品三批，测定结果见表1。
测定结果显示，以陕西购进淫羊藿药材较好，并以本结果作为投料量参考值。
5 讨论
5.1 取本品5 g，二份，分别以甲醇超声提取和本法所述方法提取。淫羊藿苷测定结果表明，以正文所述方法提取效果较好。
5.2 本方中脂溶性成份含量较多，为减少脂溶性成份的干扰及对色谱柱的污染，先用乙醚脱脂后，分别以正丁醇和醋酸乙酯提取，提取液蒸干，残渣加甲醇0.5 ml使溶解。醋酸乙酯提取液中检出淫羊藿苷，但未达到基线分离；正丁醇提取液检出淫羊藿苷，也未达到基线分离。故采用D101大孔吸附树脂柱处理，用水洗脱，弃去水液，再用70%乙醇洗脱，可使淫羊藿苷达到基线分离。检验结果表明，采用本法所述方法可使淫羊藿苷提取完全并达到基线分离。
参 考 文 献
［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典.一部,2000.
［2］ 姜 宁，刘晓鹏.淫羊藿中淫羊藿苷的快速提取及测定研究.中华中医药杂志，2008，23(1)：64.
［3］ 陈建平，廖和莲.RPHPLC法测定参龙补肾胶囊中淫羊藿苷的含量.中国药事，2007，21(2)：105.