[摘要] 目的 探讨微波在病理特殊染色中的应用。方法 对我院200例各类标本利用微波染色法进行病理染色,分析其结果。结果 经过微波进行脱水后组织切片具有组织结构清晰,切片厚薄、染色均匀、背景无气泡、颜色鲜艳、细胞变形小、切片完整等特点,对比度好,无脱片现象,并可明显缩短整个制片过程。甲级片率在50%以上,没有丙级切片。结论 本方法节省时间、染色效果稳定可靠、操作简便的特点,适合在病理科,尤其是基层单位开展。
[关键词] 微波; 病理; 特殊染色
[中图分类号] R454 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)09-57-02
Application of Microwave in Pathology
XIE Shoucheng
Meizhou City People"s Hospital,Meizhou 514031,China
[Abstract] ObjectiveTo discuss microwave in the application of special staining in pathology. MethodsWe used the microwave technology to stain 200 cases of pathological various types of specimens and analyzed the results. ResultsAfter microwave dehydration,the tissue sections could show their characteristics of clear organizational structures,slice thickness,dyeing uniformity,background-free bubbles,color,bright,small cell deformation,slice integrity,no off-chip phenomenon,etc. and the microwave technique significantly shortened the entire production process. Grade A slice rate was 50% or more,with no Grade C slices. ConclusionThis method has the advantages of saving time,stable and reliable dyeing effect,easy operation and suitable application for department of pathology,particularly suitable for grass-roots units.
[Key words]Microwave; Pathology; Special staining
随着临床对病理报告及时性的要求越来越高,目前有许多病理实验室在尝试将病理报告周期由原来3d缩短到1d。传统的化学染色费时、脱片率高,尤其一部分抗原暴露不佳者,染色效果不稳定。以上这些都大大影响临床病理诊断的准确率。微波辐射技术在组织病理学上的应用已越来越广泛,它与常规方法比较,操作简便、省时快速,为越来越多的病理学工作者所青睐。我院于2005年6月～2008年6月利用微波在病理特殊染色中应用,取得了良好效果,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
提取我院各类标本200例,涉及的组织部位有皮肤、肌肉、淋巴结、肺、胃、肠、肝、肾、乳腺、宫颈、子宫内膜、子宫肌瘤、输卵管、卵巢等各类组织,组织块大小可为2.5cm×1.5cm×0.2cm、 2.0cm×1.5cm×0.2cm或1.0cm×1.0cm×0.2cm,钙化组织取材时应避开。
1.2 仪器及方法
选用微波炉为YWY781B型,输出功率为80～700W,分5档,实验采用中高档。标本经:(1)固定:固定-脱水混合液(40%甲醛10mL,95%酒精85mL和冰醋酸5mL)中档微波处理5min后;(2)脱水:放入盛有纯丙酮10mL的微波专用容器里中档微波照射5min×4,每次更换新液;(3)透明:用二甲苯浸泡5min;(4)浸蜡包埋:65℃石蜡浸泡5min后取出包埋,切片,厚4μm。试剂为常规HE、各类特殊染色所用试剂。切片平放在湿盒中的架子上,滴苏木素染液覆盖组织,中高档微波照射40s,水洗,常规方法染伊红,脱水封片。
2 结果
经过微波进行脱水后组织切片具有组织结构清晰,切片厚薄、染色均匀、背景无气泡、颜色鲜艳、细胞变形小、切片完整等特点,对比度好,无脱片现象,并可明显缩短整个制片过程。甲级片率在50%以上,没有丙级切片。见封三图7、8。
3 讨论
组织标本需经固定、脱水、透明、浸蜡等程序后才能进行石蜡包埋切片,普通情况下需时15～20h。染色过程时间过长,直接导致脱片率变高。有些患者在手术过程中需进行快速病理诊断,以决定手术的方式和范围。冷冻切片是目前最常用的快速切片方法,但冷冻切片机价格较高,同时还需要冷冻包埋剂,切片费用也相应较高。
微波是一种高频电磁波,频率为30～30000MHz,波长在1～10000mm之间,可以显著提高分子的运动速度,带动极性分子彼此之间作180度的超高速震动,分子间的相互碰撞产生均匀一致的摩擦热,而使组织细胞的化学反应加速,增加细胞的渗透性和溶剂分子的穿透力,促进了试剂在组织内的化学扩散。低强度微波范围内可以很快地影响疏水性相互作用,氢键和范德华力促使抗原抗体分子牢固结合。20世纪70年代初,国外就有学者尝试在组织固定过程中利用微波进行组织处理。随着微波技术在病理领域的应用越来越广泛,目前已在组织处理、组织化学染色、免疫组化抗原修复、电镜制样等方面得到应用[1]。微波技术主要是根据微波能发射高频能量,组织经微波辐射后会加速内部分子间的相互碰撞,加快组织固定、脱水等过程,使溶剂分子更快进入组织内部,提高染色质量,达到快速处理组织的目的,使病理技术工作的效率大大提高。应用微波的热效应和高频电磁波作用,使某些被封闭的抗原决定簇得以重新暴露,并打开蛋白质间交联键,使标记敏感性明显提高。微波可很好地保护组织结构和细胞形态,克服了常规染色法中温度高、时间长和组织易收缩、脱片等现象。
我们在实际应用中,认为微波辐射比较适用于病理组织特殊染色中,在组织特殊染色过程中应用微波照射,将大大缩短反应时间,从而加快了组织特殊染色过程。无论是石蜡切片还是树脂包埋切片的特殊染色,都能在微波作用下加速。微波除了能大大减少染色时间外,还可减少切片的非特异性沉淀,从而使得染色背景变得干净。而且效果好,易掌握,对急性、疑难病例也有较大的定性价值。另外对病原体染色时,用640W的微波照射30～60s,还能起到杀死病原体的作用,从而减少对人的污染[2]。本次实验结果表明,微波特殊染色,从各个方面都优于未经微波处理的切片。但在应用微波的过程中也要严格控制微波的温度,因为温度过高会破坏抗体,影响标记效果。同时由于各器官组织材料自身特点不一,电子密度也不完全相同,使用的时间也不完全相同,笔者认为时间以15～20min为宜,不可超过25min。加盖玻片时动作要轻,尽量避免产生气泡,切忌加压,使组织与盖玻片间能保持一定量的抗体液。
综上所述,本方法具有灵敏度高、特异性强、节省时间、染色效果稳定可靠、操作简便的特点,所需设备微波炉在病理技术中应用范围广,价格也远较冰冻切片机和超声波组织处理仪低廉,对于各种组织不同抗体的免疫组织化学的临场应用和实验室研究有实用价值,适合在病理科尤其是基层单位开展。
[参考文献]
[1] 顾霞,魏明洁. 快速微波免疫组化染色技术在临床病理中的应用[J]. 吉林医药学院学报,2008,29(1):12-13.
[2] 杨枫. 微波辐射技术在病理组织特殊染色的应用[J]. 中国现代药物应用,2008,2(12):2.
(收稿日期:2010-01-14)