[摘要] 目的：探讨新型隐球菌性脑膜炎患者的脑脊液特点。方法：腰椎穿刺术获得脑脊液，脑脊液标本涂片墨汁染色查找带有荚膜的新型隐球菌。采用免疫细胞化学染色方法观察隐球菌数量与白细胞计数及CD4+ T细胞计数的关系。结果：28例新型隐球菌性脑膜炎患者，脑脊液白细胞数在（10~300）×106/L之间，多以淋巴细胞为主。随着疾病病程的进展和治疗，出现隐球菌先增后减与白细胞先减后增的变化趋势，而CD4+ T细胞则随疾病的治疗逐渐减少。结论：脑脊液中CD4+ T细胞可作为新型隐球菌性脑膜炎患者疗效观察的指标。
[关键词] 新型隐球菌性脑膜炎；脑脊液；CD4+ T细胞；免疫细胞化学染色
[中图分类号] R378.1+5 [文献标识码]A[文章编号]1674-4721（2011）08（b）-０11－０2
The relationship between the cryptococcus neoformans and CD4+ T cells in the cerebrospinal fluid of the patients with cryptococcal meningitis
ZHANG Qiaoquan1, SHI Jianquan2, WANG Juan1, ZHU Haiqing1, LIN Xingjian2�
1.Department of Pathology, Brain Hospital Affiliated to Nanjing Medical University, Jiangsu Province, Nanjing 210029, China; 2.Department of Neurology, Brain Hospital Affiliated to Nanjing Medical University, Jiangsu Province, Nanjing 210029, China
[Abstract] Objective: To investigate the features of cerebrospinal fluid of the patients with cryptococcal meningitis. Methods: Cerebrospinal fluid of the patients was obtained by spinal puncture. All cerebrospinal fluid specimens were smeared and tested by ink staining to find the cryptococcus neoformans with capsule. The relationship between the cryptococcus neoformans and white blood cells as well as CD4+ T cells was observed by immuncytochemistry. Results: In 28 cases of cryptococcal meningitis patients, the white blood cell counts of the cerebrospinal fluid were about (10-300)×106/L, mostly lymphocytes. With the progression of the disease and treatment, the number of cryptococcus neoformans increased at the early time and then decreased and the number of the white blood cells decreased at the early time and then increased, while CD4+ T cells were gradually reduced as the treatment was administrated. Conclusion: CD4+ T cells in cerebrospinal fluid could be regarded as an indicator of efficiency of treatment of cryptococcal meningitis.
[Key words] Cryptococcal meningitis; Cerebrospinal fluid; CD4+ T cells; Immuncytochemistry
新型隐球菌性脑膜炎（cryptococcal meningitis，CM）是由新型隐球菌感染脑膜和脑实质所致的亚急性或慢性中枢神经系统感染性疾病，易发生于恶性肿瘤、自身免疫疾病、全身消耗性疾病、严重创伤或免疫抑制剂使用等情况。新型隐球菌性脑膜炎临床表现不典型，起病隐袭，病程长，误诊率高，死亡率高，预后差[1-3]。现对28例经病理确诊为新型隐球菌性脑膜炎患者的脑脊液特点进行回顾性总结分析，以提高对此病临床和病理的认识。
1 资料与方法
1.1 一般资料
本院病理科2009年1月~2010年12月确诊的28例患者，男12例，女16例；年龄15~75岁。临床主要表现为发热，头痛，频繁呕吐，视物模糊等，依赖脑脊液标本涂片墨汁染色发现带有荚膜的新型隐球菌确诊。
1.2 方法
腰椎穿刺术获得脑脊液3~4 ml，脑脊液细胞学制片，登记，编号，使用细胞离心机（SHANDON Cytospin 3），每加样器内加0.2 ml，1 000 r/3 min，收集玻片自然凉干，入冷丙酮固定3~5 min，放入4℃冰箱备用。免疫标记，将4℃冰箱备用制片取出，凉干，用Super PAP Pen笔划定区域，加抗体CD4，放入孵育盒，4℃冰箱过夜，第2天将4℃冰箱孵育盒取出，室温下复温10~20 min，PBS冲洗３次，每次３ min，加二抗，放入37℃恒温箱30 min，取出PBS冲洗３次，每次３ min，DAB显色，镜下观察。
2 结果
2.1 细胞学特点
28例新型隐球菌性脑膜炎患者，脑脊液白细胞数在（10~300）×106/L之间；其中，25例在100×106/L以下，2例在（100~200）×106/L之间，1例在（200~300）×106/L之间。细胞学分类结果提示：25例患者以淋巴细胞为主，淋巴细胞比例在80%~90%之间；9例患者脑脊液中出现中性粒细胞（3例患者脑脊液中性粒细胞比例在50%~60%之间，6例在10%以下）；8例存在浆细胞，5例存在吞噬细胞，比例均在5%以下。
2.2 新型隐球菌数量与白细胞计数及CD4+ T细胞计数的关系
笔者对2例有5次脑脊液检查结果且经治疗痊愈患者（患者A、B）的脑脊液特点进行分析，结果发现：随着疾病病程的进展和治疗，新型隐球菌数量曾有短暂增加，之后逐渐减少；而白细胞计数则逐渐减少，但第5次脑脊液检查白细胞计数均较前次增加；CD4+ T细胞计数则随疾病病程的进展和治疗均逐渐减少。具体结果见图1、2和图3。
3 讨论
新型隐球菌性脑膜炎是由新型隐球菌感染脑膜及脑实质所引起的亚急性或慢性脑膜炎，是真菌性脑膜炎最常见的一种[4]。新型隐球菌呈圆形或卵圆形，外裹由细胞壁和荚膜组成的被膜，广泛存在于土壤、蔬菜、牛奶及鸽粪中。新型隐球菌多由呼吸道吸入，可产生一种胞外磷脂酶B，破坏肺泡中的表面活性物质，进而改变肺组织的物理特性，使菌体较易在肺内形成病灶，数月内经血行播散至脑或脑膜，引起炎症反应。新型隐球菌性脑膜炎由于其症状的不典型性及治疗的不规范性，误诊率及病死率较高[5]。近年来随着广谱抗生素、激素、免疫抑制药的广泛或不适当应用，以及免疫缺陷性疾病及器官移植患者的增加，该病罹患率亦呈增长趋势[6-8]。本病起病隐袭，约2/3患者首先表现为上呼吸道感染症状，如畏寒、发热、头痛、头昏、恶心、全身不适等症状，经一般治疗无效，症状逐渐加重，尤其是头痛症状逐渐剧烈不能忍受。新型隐球菌性脑膜炎易被误诊为结核性脑膜炎，朱秋红[9]通过回顾性分析近5年来报道的新型隐球菌性脑膜炎459例，发现初诊误诊的218例中结核性脑膜炎占103例。临床确诊的金标准是脑脊液或脑组织病原学检查发现新型隐球菌，多种方法、多条途径查找新型隐球菌，可提高该病的早期诊断率。由于其检出率受病灶部位、病程发展阶段等影响，故对可疑或久治不愈反复发作的脑膜炎，应反复作脑脊液墨汁染色、培养或动物接种以寻找病原[10]。脑脊液的病理学检查对于隐球菌性脑膜炎的诊断及疗效的观察至关重要，故分析该病的脑脊液细胞学特点对于指导临床具有重要的意义。
本研究通过对28例新型隐球菌性脑膜炎患者的脑脊液细胞学特点的回顾性分析，总结出新型隐球菌性脑膜炎细胞学的特点：脑脊液白细胞多在100×106/L以下，少数在100×106/L以上；分类多以淋巴为主，部分可查见中性粒细胞，但比例多在10%以下，少数可达50%~60%（与病程有一定关系）；部分可查见吞噬细胞及浆细胞，比例均在5%以下。
本研究对2例经治疗痊愈的新型隐球菌性脑膜炎患者5次脑脊液的对比分析，结果提示：随疾病病程的进展和治疗，脑脊液中新型隐球菌的数量先增后减与白细胞先减后增的变化趋势；其他研究也证实了这个结论[11-12]。而CD4+ T细胞则随疾病的治疗逐渐减少，提示CD4+ T细胞可以作为新型隐球菌性脑膜炎治疗疗效观察的指标。本研究病例较少，有待于扩大样本量进一步观察该病的脑脊液特点，尤其是需要大样本来研究CD4+ T细胞与脑脊液中隐球菌数量之间的关系。
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（收稿日期：2011-06-23）
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