【摘要】 目的 制备头孢他啶滴眼液并建立其质量控制方法。方法 配制头孢他啶滴眼液,采用高效液相色谱法测定头孢他啶的含量,并考察其稳定性。结果 所制备的制剂为无色至微黄色或微黄绿色的澄明液体,鉴别、检查均符合中国药典2010版中的相关规定;头孢他啶检测浓度的线性范围为50～300 μg/ml(r=0.999 9),平均回收率为100.2%,RSD为0.87%;本品对热不稳定,4℃可存放40 d。结论 该制备方法简便、可行,质量可控。本品应冷处避光保存。
【关键词】头孢他啶;滴眼液;制备;质量控制
Preparation and quality control of Ceftazidime eye drops
WU Wei, HE Mei-feng, TANG Xi-lan, et al.Zhongshan Ophthalmic Center, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510060, China
【Abstract】 Objective To prepare Ceftazidime eye drops and establish its quality control method.Methods Ceftazidime eye drops was prepared. The content of Ceftazidime was determined by HPLC. The stability of the preparation was investigated. Results The preparation was colourless to micro-yellow or yellowish green and in conformity with the description of China Pharmacopeia (2010 edition) in identification and test. The linear concent ration range of Ceftazidime was 50～300 μg/ml(r = 0.999 9) and the average recovery was 100.2 % (RSD = 0.87%). Ceftazidime eye drops was unstable towards heat, while could be stored for 40 days at 4℃. Conclusion The preparative method is simple and feasible and the quality of the preparation is controllable.But the preparation should be stored at 2℃-10℃.
【Key words】 Ceftazidime;Eye drops;Preparation;Quality control
作者单位:510060 中山大学中山眼科中心
眼部细菌感染性疾病为眼科常见病,在发展中国家,细菌性角膜炎已成为角膜盲的首位致盲因素[1],而绿脓杆菌等革兰阴性菌为医院感染的主要病原菌[2],由其感染引起的角膜病变,发病迅速,对角膜破坏性大,如得不到有效的治疗,可发生角膜溃疡穿孔,甚至眼内感染,最终眼球萎缩,当临床确诊或疑为本病时,应立即进行抢救,首选药物治疗。头孢他啶(Ceftazidime)为第三代头孢菌素类抗生素,因具有抗菌谱广,尤其对绿脓杆菌杀菌作用强等特点,常作为经验或根据药敏试验结果应用于临床[3]。目前,头孢他啶眼用制剂市场上无供应,需临时配制[4],为此,我们根据临床的需要,研究头孢他啶滴眼液的制备工艺和质量控制方法以及考察其稳定性,现介绍如下。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪,包括G1314A 紫外检测器,G1311A 四元泵,G1316A 柱温箱,G1322A 真空脱气机,G1329A 带温控自动进样器及其化学工作站(美国Agilent公司);320pH计(梅特勒-托利多(上海)有限公司);MARK3型渗透压仪(美国Advanced公司);BT125 d电子天平(北京赛多利斯有限公司);恒温仪(上海一恒科技有限公司)。头孢他啶对照品(中国药品生物制品检定所,纯度:84.8%,批号:130484-200803);注射用头孢他啶(葛兰素史克,批号:F633);头孢他啶滴眼液(自制);乙腈为色谱纯;乙二胺四乙酸二钠,氯化钠,对羟基苯甲酸乙酯为药用,磷酸氢二钠,磷酸二氢钾为分析纯,水为注射用水。
2 处方与制备
2.1 处方 注射用头孢他啶(按头孢他啶计)50.0 g,氯化钠3.0 g,乙二胺四乙酸二钠1.0 g,对羟基苯甲酸乙酯0.3 g,注射用水加至1 000 ml。
2.2 制备 取对羟基苯甲酸乙酯溶于适量的热注射用水中,再加入乙二胺四乙酸二钠,氯化钠,搅拌使溶解,封装,100℃流通蒸汽灭菌30 min;另用适量灭菌注射用水溶解注射用头孢他啶,合并上液,加注射用水至全量,搅匀,过滤,无菌分装,即得。
3 质量控制
3.1 性状 本品为无色至微黄色或微黄绿色的澄明液体。
3.2 鉴别 在“3.4.7”含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
3.3 检查
3.3.1 pH值应为 6.0～7.0。
3.3.2 渗透压摩尔浓度 应为260～320 mOsmol/kg。
3.3.3 其他 应符合中国药典2010版眼用制剂项下规定。
3.4 含量测定
3.4.1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C�18�柱(250 mm × 4.6 mm,5 μm,迪马公司);流动相:乙腈-pH 7.0磷酸盐缓冲液(称取无水磷酸氢二钠42.59 g,磷酸二氢钾27.22 g,加水溶解并稀释至1 000 mL)-水(2∶10∶88);流速为2 ml/min;检测波长为254 nm;柱温为50 ℃;进样量:20 μl。在上述色谱条件下,色谱图见图1。
图1 高效液相色谱图
A-对照品;B-样品;C-样品(降解后)
3.4.2 标准曲线的制备 精密称取头孢他啶对照品约50 mg,置50 ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,作为储备液(浓度为1 mg/ml)。精密量取储备液各0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 mL,置10 mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,得系列浓度对照品溶液,分别取各对照品溶液20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,量取峰面积。将峰面积(A)与浓度(C)做线性回归,得头孢他啶的线性回归方程为:A = 23.9459 C-28.1605,相关系数r = 0.999 9,结果表明,头孢他啶在50～300 μg/ml内,A与C呈良好线性关系。
3.4.3 精密度试验 精密量取“3.4.2”项下对照品溶液(150 μg/ml),按上述色谱条件重复进样6次,头孢他啶峰面积测量值的RSD为0.70%,由以上结果可知,系统稳定。
3.4.4 重复性试验 精密量取同一批号样品6份(批号:091218),照“3.4.7” 项下方法测定其含量并计算,头孢他啶的含量为(99.73 ± 0.55)%。
3.4.5 加样回收率试验 精密吸取已知含量的样品1.0 ml,置50 ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀;取稀释液1.5 ml,置10 ml量瓶中,共6份,分别精密加入浓度为1 mg/ml的头孢他啶储备液0.8,1.0,1.2 ml,用水稀释至刻度,进样20 μl,记录色谱图,回归方程计算回收率。结果平均加样回收率为100.2%,RSD 为0.87%。表明含量测定方法可靠。
3.4.6 稳定性试验 取“3.4.7”项下供试品溶液(批号:091002),分别于0,1,2,3,4,5 h 测定其峰面积,头孢他啶峰面积的RSD为1.03 %。结果表明,溶液在5 h内稳定。
3.4.7 含量测定 精密吸取头孢他啶滴眼液1.0 ml,置50 ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀;取稀释液1.5 ml,置10 ml量瓶中,用水稀释至刻度,作为供试品溶液,滤过,进样20 μl。结果3批样品(批号:091002,091218,100116)的标示百分含量分别为100.5%,99.6%和101.1%。
3.5 稳定性考察 将三批样品(批号:091002,091218,100116)分装于玻璃瓶中,分别置于冰箱4℃和恒温恒湿仪25℃避光条件下,定时取样,并外观性状,测pH值,用高效液相色谱法测定头孢他啶的含量。结果头孢他啶滴眼液在25℃下放置2 d后,含量下降>10%,溶液颜色加深,色谱图可见明显降解产物峰(见图1C);而滴眼液在4℃下放置40 d,含量分别相当于初始浓度的91.2%、90.4%和90.7%,溶液澄明,pH值几乎不变,均维持在6.0～7.0之间。�
4 眼刺激性试验
取体重2 kg左右健康家兔5只,每只均于右眼滴入头孢他啶滴眼液1滴,左眼滴入生理盐水1滴作对照,3次/d,连用7 d,观察兔眼局部反应情况,实验结果显示受试动物均未见羞明、流泪、充血、水肿等现象,表明本制剂无眼刺激性。
5 讨论
5.1 头孢他啶结构中的 β-内酰胺环不稳定,易受亲核、亲电试剂的攻击,与酸、碱及某些金属离子作用时易发生水解和分子重排导致其疗效降低和过敏反应增加[5]。其滴眼液因处方组成不同而稳定性有所不同[6],本处方中加进金属螯合剂乙二胺四乙酸二钠,使溶液保持相对稳定。
5.2 由于抗菌药物的不合理应用,细菌的耐药问题也日趋严重,目前,临床上最常见多重耐药菌是产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌[7],庞晓军等[8]报道,乙二胺四乙酸二钠可使耐药菌恢复对抗菌药物敏感性,因此,本处方组成将有利于提高头孢他啶的抗菌作用。
5.3 温度对β-内酰胺类抗生素的稳定性影响较大[9],从本实验结果可见,头孢他啶滴眼液在25℃下有效期不超过2 d,而在4℃下放置40 d,含量下降小于10%。国外有文献报道[10],-20℃头孢他啶滴眼液有效期可达75 d。故本品应低温保存。
5.4 本实验参照中国药典 2010 版二部[11],采用高效液相色谱法测定头孢他啶的含量,当柱温为 20℃ 时,出峰时间很迟且峰形较差,而柱温为 50℃,流速改为 2 ml/min时,效果满意。
5.5 头孢他啶滴眼液多为临时配制后直接用于患者。实验研究结果表明,本制剂制备方法简便、可行,质量可控,为今后预先配制该滴眼液的可行性提供依据,其意义在于减少临时配药可能出现的差错和污染,提高用药安全性,以及可及时提供药品给患者使用和有利于制订药品生产计划。
参 考 文 献
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