摘 要：目的：考察玄丹巴布剂经皮用药的安全性。方法：参照《中药新药研究指导原则》，采用最大给药量试验观察皮肤给药后，动物短期内出现的急性、毒性反应及其程度；结合一般情况观察与组织病理学检查，综合判断动物贴敷部位的局部组织和乳腺刺激性反应；对豚鼠皮肤多次局部贴敷致敏，观察其过敏反应。结果：药物贴敷给药后对大鼠的最大给药量为6g/kg，短期内均未见毒性反应及死亡情况；局部刺激性实验中，动物一般状况良好，未发生全身反应甚至死亡情况；对豚鼠皮肤多次刺激，致敏试验显示药物对豚鼠皮肤无明显致变态反应作用。结论：玄丹巴布剂对家兔皮肤无明显刺激性及毒性作用，其临床使用安全、可靠。
关键词：玄丹巴布剂；刺激性；急性、毒性；变态反应
中图分类号：R965 文献标识码：A 文章编号：1673-2197(2008)06-030-02
玄丹巴布剂是在膏剂的基础上改进而来，由丹参、淫羊藿、延胡索、三七、海藻等药组成，具有活血化瘀、消肿止痛等功效。该药局部外敷治疗乳腺增生，临床疗效显著[1]。为了保证玄丹巴布剂临床使用的安全、有效，我们参照《中药新药研究指导原则》[2]，对其急性、毒性、皮肤刺激性以及过敏反应进行系统性实验研究。采用最大给药量试验，观察动物在短期内出现的急性、毒性反应及其程度；结合一般情况观察与组织病理学检查，综合判断是否发生相关局部刺激性反应；对豚鼠皮肤多次局部贴敷给药致敏以观察其过敏反应，从而客观评价其可能存在的毒性，为其临床应用提供安全性参考依据。
1 材料与方法
1.1 动物
大耳白家兔70只，体重2.0~2.5kg；健康白色豚鼠30只，体重250~300g，均由中国医科大学实验动物中心提供。
1.2 试药
玄丹巴布剂，给药剂量分别为6g/kg，4g/kg，2g/kg，批号：20051123；巴布剂赋形剂，批号：20051121。均由本院制剂室提供。
1.3 家兔皮肤急性、毒性试验
将42只家兔随机分为7组，即赋形剂组、完整皮肤的玄丹巴布剂高、中、低剂量组及破损皮肤的玄丹巴布剂高、中、低剂量组。每组6只，雌雄各半。用10%硫化钠给家兔背部脱毛，去毛面积约150cm2，破损皮肤的制作采用消毒铁锉划破(以渗血为度)。去毛后将受试药玄丹巴布剂贴于脱毛区，低剂量组以临床用制剂2g/kg、中剂量组4g/kg、高剂量组为6g/kg，并用无刺激性胶布加以固定，每只动物分笼饲养，给药24h后去除玄丹巴布剂，去除玄丹巴布剂后1、24、48、72h至第七日，每日观察并记录动物的体重、皮毛光泽、饮食、眼和粘膜的变化，呼吸中枢、神经系统、四肢活动和死亡情况，并于7日后处死家兔，解剖观察其心、肝、脾、肺、肾等脏器的变化。
1.4 家兔皮肤刺激性试验
取28只成年健康大耳白家兔，雌雄各半，将家兔腹部用10%硫化钠脱毛，脱毛面积大约150cm2。将大耳白家兔随机分为7组，即完整皮肤高、中、低剂量组和破损皮肤高、中、低剂量组以及赋形剂组，每组4只。破损皮肤的制作采用砂纸磨损，并作“#”字形切口(以渗血为度)。去毛后动物腹部分别贴敷玄丹巴布剂高剂量组6g/kg、中剂量组4g/kg、低剂量组2g/kg，对照组贴敷赋形剂对照，并用无刺激胶布加以固定，贴药后24h摘下巴布剂，清洗干净，观察动物的一般状态、行为、体征及局部皮肤有无红斑和水肿、脱屑、结痂等反应，并观察是否有色素沉着、皮肤粗糙或菲薄等情况。然后，连续贴药4周，每天贴敷时间为8h，每天重复上述观察皮肤反应，停药后再观察一周。观察结束后，取贴敷部位的局部组织和乳腺做组织病理学检查。
1.5 豚鼠皮肤变态反应试验
取健康白色豚鼠30只，雌雄各半，用10%硫化钠将豚鼠背部两侧对称脱毛，去毛面积3×3cm2。将豚鼠按体重、性别随机分成三组，每组10只，第一组给玄丹巴布剂，第二组给赋形剂对照组，第三组阳性对照组，阳性致敏物用2、4-二硝基氯代苯配成1%的致敏浓度和0.1%激发浓度(用70%酒精配制)。
(1)致敏接触：脱毛24h，取玄丹巴布剂0.2g贴敷在豚鼠左侧脱毛区，并以无刺激胶布固定封闭，持续6h，第7天和第14天以同样方法重复一次。赋形剂对照组(给予赋形剂)与阳性对照组(1%的致敏浓度)方法同上。
(2)激发接触：于末次给玄丹巴布剂致敏后14d，将玄丹巴布剂0.2g贴敷于豚鼠背部左侧脱毛区，阳性对照用0.1% 2、4-二硝基氯代苯，空白对照用赋形剂，6h后去掉受试药物，即刻观察，并于24、48、72h再观察有无过敏反应，并按表记录各时间过敏反应分值并判定结果 。
2 结果
2.1 家兔皮肤急性、毒性试验
玄丹巴布剂在低剂量2g/kg、中剂量4g/kg和高剂量6g/kg外用时对完整皮肤家兔和破损皮肤家兔的行为、活动、饮食、皮毛光泽、呼吸中枢、神经系统和体重无任何不良影响，无一家兔死亡。7日后处死家兔，解剖观察其心、肝、脾、肺、肾等主要脏器未见异常。详细结果见表1。
2.2 家兔皮肤刺激性试验结果
玄丹巴布剂高、中、低三个剂量组对家兔完整皮肤未发现红斑和水肿反应，对家兔破损皮肤也未发现明显的红斑和水肿反应，平均分值均小于0.5。组织学检查与空白对照组比较，其贴敷部位的局部组织的病理学检查无异常变化。对照《新药临床前研究指导原则》中《皮肤刺激性强度评分标准》，判定玄丹巴布剂多次给药对完整及破损皮肤均无刺激性(平均反应分值范围