【摘 要】 目的 研究快速ELISA试剂盒过有效期近2年后是否有应用价值。方法用过有效期近2年的快速ELISA试剂盒通过家用微波-ELISA法检测日本血吸虫病患者65份血清稀释成1:50,1:100,1:200,1:400 计算抗体阳性检测率与未过有效期的ELISA试剂盒阳性检测率并进行对比。结果 过有效期近2年的ELISA试剂盒在诊断日本血吸虫病时仍有价值。结论 过有效期近2年的ELISA试剂盒与未过有效期的ELISA试剂盒来检测日本血吸虫都有较好阳性反应强度且未见显著差异。特别对于某些药品短缺情况下的偏远山区或经济欠发达地区适用。
【关键词】 过有效期；快速ELISA试剂；日本血吸虫病
近年来我国血吸虫病在一定范围内有相当程度的回升，但是很多疫区都是属经济欠发达地区，因此经费问题更为重要，本实验旨在研究经费有限情况下快速ELISA试剂盒过有效期近2年后有无应用价值。
1 材料
收集嘉兴、江西提供的各期日本血吸虫病人血清65份，其中男性32份，女性33份，年龄30～63岁。
2 实验方法
2.1 主要设备和试剂。中国医学科学院寄生虫研究所提供的没过有效期和过有效期近2年的快速ELISA试剂盒（有效期1年）；格兰仕家用炉（型号：WP 750L17）；试管65支；微量加样器1000ml 1支，100ml 2支，20ml 1支 ；粘胶纸4张；计时器1只；吸水纸若干。
2.2 微波-ELISA操作过程按顾启章等介绍方法[1]进行。微波选用功率330W，辐射时间和频率为每分次55s/2min共2次，加入显色剂后置室温，观察反应，阴性参考血清孔为透明，阳性参考血清孔呈蓝色。并取阳性血清管稀释后再次检测，反复以上步骤直到稀释率1∶400检出率明显下降为止。
3 结果
通过本次实验（表1），可见过有效期的ELISA试剂盒与未过有效期的ELISA试剂盒在检测日本血吸虫都有较好阳性反应强度且未见显著差异。
4 讨论
我国血吸虫病在防治初期约有1100万血吸虫病患者。据2001年调查报告我国现有82.1万血吸虫病患者，其中慢性病人近79.5万例，急性病人近600例，晚期血吸虫病人近2.6万例，全国有9000万人口受到血吸虫病威胁。患者大致分布如下：湖北27.8万、湖南21.1万、江西11.2万、四川8.1万、安徽5.9万、云南4.3万、江苏3.7万、浙江0.1万。并且由原来流行于长江流域及其以南的12省（市、区）的426县（市、区），经过50余年的有效防治，至2002年，已有广东、上海、福建、广西、浙江5省（市、区）阻断了血吸虫病的传播[2]。但是近20年来，我国钉螺面积一直维持在35亿m2左右。随着退田还湖、平垸行洪的开展，将有一些洲垸重新变为有螺区，此外，洪水频发使钉螺扩散。因此，在今后的若干年中，我国钉螺面积会有相当程度的回升，防治工作不容忽视。诊断是防治工作最基础的环节，当前常用的血吸虫病诊断方法是病原学检查与免疫学方法，病原学方法主要是粪检，在确诊病人方面起重要作用，但有许多不利的方面，特别是用于科研统计等，所以当前应用的主要有皮试、环卵沉淀试验(COPT)、间接血凝试验(IHA)以及酶联免疫吸附试验(ELISA)[3]，在实际应用过程中具有各自的优点与不足，表现在特异性、敏感性及实验所需时间等方面的差异（表2）。从表中可见快速ELISA试验敏感性、特异性较好，近来又发现了微波-ELISA试验方法[4]只需5min即可加底物染色，大大缩减了试验时间，但ELISA试验方法受条件限制较多。本次课题为利用其它权威机构的科研成果，所用为中国医学科学院寄生虫研究所提供的快速ELISA试剂盒，是比较成熟稳定的单抗试剂盒，在前人的成果上进行过有效期和在有效期内的对比实验，可以避免许多实验影响因素，使课题得以在短期内集中精力，集中时间完成。世界银行贷款血防项目结束之后，化疗和灭螺药物难以保证，疫情随时可能反弹；已控制传播地区，有的发生新感染和急性感染；已阻断传播地区，因经费短缺，难以开展有效的监测工作，有的地区钉螺大幅回升。而血吸虫病现主要分布在湖南、湖北、江西、安徽、江苏5省湖区及川、滇山区。这些地区都属经济欠发达地区，因此经费问题尤为重要，也就使本次课题有了利用价值。本次实验拟在探索在微波-ELISA试验[5]的基础上对试验条件尺度的放宽，即用过有效期的ELISA试剂盒来检测日本血吸虫病。本实验结果（表1～2），可见过有效期近2年的ELISA试剂盒与未过有效期的ELISA试剂盒来检测日本血吸虫都有较好阳性反应强度且未见显著差异。特别对于某些药品短缺的偏远山区或经济欠发达地区适用，但笔者认为尽可能使用未过期试剂，过期试剂毕竟还是存在一定数值差异的。
参考文献
1顾启章，张宏莹，朱善济，等.微波辐射ELISA诊断日本血吸虫病的初步研究.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1999，7：115-116
2郑江.我国血吸虫病防治的进展及面临的挑战.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2003，21 (1)：4-5
3严自助，王文，吕再婴，等.血吸虫病抗体的快速测定.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1996，14:302
4袁红，张宏莹，杨艳宏，等.家用微波ELISA检测血吸虫病血清抗体的观察.浙江预防医学，2002,14(3):78
5张宏莹，袁红，顾启章.微波ELISA法对日本血吸虫病血清抗体的观察.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2003，21(1):54
（收稿日期：2007-07-25）