[摘 要]：目的：探讨炮制对虎杖中有效成分大黄素含量的影响。方法：采用薄层扫描法对虎杖不同炮制品中大黄素进行定性、定量分析。结果：酒炙品、盐炙品中大黄素含量与生品相比有不同程度的增加。结论：不同炮制方法对虎杖中大黄素含量有一定的影响。
[关键词]：虎杖 炮制 大黄素 薄层扫描法
虎杖为蓼科植物虎杖(Polygonum CuspidatumSieb etzucc)的干燥块茎和根，其性微寒，味微苦。具有清热利湿、散瘀定痛、通便解毒、止咳化痰等功效。用于关节痹痛，湿热黄疸，经闭，癯瘕，水火烫伤，跌打损伤，痈肿疮毒，咳嗽痰多。传统炮制方法首载于《千金翼方》：“去头脑，洗去土，燥切”。历代炮制还记载有“虎杖，采得后，细研，却有虎杖叶裹一夜，出煞干用”。“虎杖取根，以汤人器中，渍五七日，汤冷乃易，日换3、4遍，洗去涎，暴干用之或再炮”。现代炮制以“洗净，闷润至透，切厚片”的润品为主。虎杖主含蒽醌类和芪类化合物，其中蒽醌类成分大黄素具有抗菌、抗肿瘤、解痉、杀灭钩端螺旋体的作用。近年来虎杖的研究多限于化学成分及药理研究，其炮制工艺研究则较少。本文采用高效液相色谱法对虎杖的生品、酒炙品、醋炙品、盐炙品进行了定性定量分析，为完善虎杖饮片质量标准提供了实验参考依据。
1 实验材料和仪器
1．1 材料 虎杖药材饮片购于广西南宁药材站，经广西中医学院中药鉴定教研室何报作教授鉴定为蓼科植物虎杖(Polygonum Cuspidatum Sieb etzucc)的干燥块茎和根；对照品：大黄素(批号0756-20009)由中国药品生物制品检定所提供。试剂均为分析纯。
1．2 仪器：CS-9000薄层扫描仪(日本岛津)；紫外线分析仪(上海第三分析仪器厂)；电子分析天平(上海分析仪器厂)；定量毛细管(USA Dum-mound)。
2 实验条件
2．1 色谱条件 吸附剂：硅胶G薄层板，展开剂：石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15:5:1)的上层液，上行展开9cm。
2．2 检测波长 供试品溶液、对照品溶液及阴性对照液经点样展开后，在400～700nm的波长范围内扫描大黄素斑点，结果供试品与对照品在440nm处均有最大吸收，且无阴性干扰，因此选定440nm为检测波长。
然后将方法与结果改成
3 方法与结果
3．1 薄层板的制备：薄层扫描测定板：硅胶G20g，加0.7％CMC-Na溶液60ml，用HJQ-A型混浆器搅拌均匀，在10×20cm的玻璃板上用薄层制板仪铺成一定厚度的薄层板，晾干，在105％活化1小时。
3．2 供试品溶液制备：分取不同炮制品粉末约0.5g，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇约90ml，超声处理(功率120W，频率50KHz)30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精量取滤液10ml，置150ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5moL/L硫酸液20ml，水蒸气加热1小时，稍冷，加氯仿60ml，回流2小时，冷却，移置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，洗液并人分液漏斗，分取氯仿层置50ml量瓶中，酸液用少量氯仿提取，氯仿液并人50ml量瓶液中吸取25ml，置蒸发皿中(水浴蒸发)，挥去氯仿，最后液移入5ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，即得不同炮制品的供试溶液。
3．3 大黄素对照品液制备：取大黄素对照品(0756-200009)10.5mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3．4 阴性对照液制备：取分析纯甲醇作为阴性对照液。
3．5 定性分析：选用石油醚(30-60~C)一甲酸乙酯－甲酸(15:5:1)的上层液为展开剂，上行展开9cm能将欲测成分完全分离，在254nm紫外线照射下可见大黄素的荧光斑点，置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变红色。
3．6 线性关系考察：分别精密吸取大黄素对照品溶液2、4、6、8μl，分别点于同一硅胶C薄层板上，依法展开，取出，晾干，在440mm处，用单波长扫描测定，以点样量为横坐标，以斑点峰面积为纵坐标，绘制标准曲线， 回归方程为Y=89005X+11667.4，R=0.9963，由此可见，大黄素点样量在0.21～1.05μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。
3．7 精密度考察：取同一对照品液(0756-200009)4μl在同一板块上点样5次，按含量测定方法操作，测定结果5个点峰面积平均值为470445，RSD=0.84％。
3．8 斑点稳定性考察：精密吸取同一对照品(0756-2000094)μl，在同一块薄层板上点样9次，展开，晾干。间隔15、15、30、60、60、60分钟测定一次斑点吸收峰面积，结果表明样品斑点在4小时内稳定，测定结果RSD=1.35％。
3．9 重复性实验：取已测得含量醋炙品6份，分别进行测定，含量的RSD:4.2％，表明本法有良好的重复性。
加样回收测定：精密称取已测得含量的醋炙品本品0.25g，添加大黄素含量对照品适量，按上述方法和条件进行样品深液制备和含量测定，计算回收率，结果平均回收率为103.5％。
3．10 供试品定量分析：取对照品溶液2μl和4μl，样品溶液6μl，以外标两点法测定其大黄素的含量，测定结果见下表。
4 讨论
4．1 薄层鉴别试验结果表明：不同炮制方法对虎杖中大黄素组份的影响不大。大黄素含量测定结果大小依次为：酒炙品＞醋炙品＞盐炙品＞生品。炮制后大黄素的含量与生品相比均有不同程度的增加，增加幅度最高达24.3％，提示不同炮制过程(过热、酒制等)对虎杖中大黄素含量有一定的影响。
4．2 大黄素为蒽酯类化合物，其甙和甙元易溶于甲醇。在测定中，用甲醇提取，并将加稀硫酸水解与氯仿萃取合并成一步完成，可使水解出的大黄素立即溶于氯仿中，简化了操作步骤，节省时间。选用氯仿作萃取剂分层快，便于分离，避免有效成分损失。
4．3 有文献报道，薄层扫描法测定大黄素的含量展开剂的选择有甲苯－乙酸乙酯－甲酸(15:2:1)、石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15:2:1)。本实验曾用前者作为展开剂对本品进行试验，结果大黄素的斑点颜色较淡，不易辩别，且分离效果较差。为此，实验中改用后者作为展开剂，结果斑点颜色呈明显的黄色，斑点的形状较均匀，分离效果较好。