陈礼大，黎豫川，徐献梅 ，杨元凤，罗玉玲
(贵州中医药大学第二附属医院，贵州 贵阳 550025)
鹿晶益气生血丸为复方中药制剂，由黄芪、白芍、党参、炙甘草、炒酸枣仁等14味中药组成。方中黄芪味甘、性微温，归肺、脾经，有补气升阳、生津养血之功[1]，白芍味苦、酸，性微寒，归肝、脾经，有养血调经、敛阴止汗之功[2]，二者合用益气养血为君药；
党参味甘，性平，归脾肺经，有健脾益肺，养血生津之效[3]，炙甘草味甘，性平，归心、肺、脾、胃经，取其补脾和胃，益气复脉之功[4]，炒酸枣仁味甘、酸，性平，归肝、胆、心经，具养气补肝，宁心安神之效[5]，三药同用辅助君药益气、养血、安神。本方具有补气养血，养心安神之功效。主治气虚血亏、心脾两虚证，适用于缺铁性贫血中医证属气血亏虚证。
本方为我院血液科协定方，治疗缺铁性贫血临床疗效显著，为方便患者服用、携带，研制成水丸，为临床使用提供便利。水丸又称水泛丸，是中药的传统剂型之一，早在《五十二病方》中就有对水丸的记载。水丸通常是由药材细粉以水或水性液体(酒、醋、药汁等)为黏合剂，用泛制法制成[6]。课题组参考文献[6-7]的方法，采用单因素方差分析、正交试验法、HPLC法等现代技术，研究鹿晶益气生血丸制备工艺，为医院制剂备案品种申报提供依据，为提高中药传统剂型水丸应用工艺与核心技术提供实验基础。
1.1 设备与仪器
G200-Q夹层锅(重庆市长寿湖机械制造有限公司)；
2500C多功能粉碎机(永康市艾泽拉电气有限公司)；
WF-30B万能粉碎机(江阴市双佳机械制造有限公司)；
CT-C热风循环干燥箱(中国常州建达干燥设备有限公司)；
1260infinity型HPLC仪(安捷伦科技有限公司)。
1.2 试药
芍药苷对照品(批号：110736-202044)来源于中国食品药品检定研究所；
饮片均来源于贵阳济仁堂饮片有限公司；
分析甲醇(批号：67-56-1)、乙腈(批号：75-05-8)来源于Sigma-Aldrich化工试剂有限公司；
磷酸(批号：20120425)来源于国药集团化学试剂有限公司。
2.1 处方分析
处方共14味中药，剂量较大，为方便临床应用，拟制备成水丸，但处方中黏性中药较多，直接粉碎困难，且服用量大，因此对处方部分饮片进行提取，所得药汁作为湿润剂，另一部分进行粉粹成细粉，泛制法制丸。
2.2 考察指标选择
本制剂制备主要分为提取工艺和成型工艺两部分：提取工艺以出膏率为指标进行考察；
成型工艺，将白芍主要药效成分芍药苷含量作为指标成分进行考察，同时考察起模用粉量、药汁用量、干燥温度、干燥时间、成型难易程度、外观、溶散时限、重量差异等指标，优选最佳成型工艺。
2.3 提取工艺参数考察
2.3.1 饮片吸水率考察
称取3份提取用的处方饮片加入6倍量水浸泡，每隔一段时间观察一次浸润程度，待药物浸透为止，滤过至尽，药渣称重，计算吸水率(%)，试验结果见表1。
表1 药材吸水率试验结果Tab.1 Water absorption test results
结果可知，药材吸水率为126.96%，结合大生产实际，在水提取时，确定为第一次加水时多加1.5倍量的水。
2.3.2 饮片浸泡时间考察
在满足饮片吸水率条件下，考察浸泡时间，以总固体物收率为考察指标，优选适宜浸泡时间。
(1)提取液制备
称取处方中需提取部分的饮片，首次加9.5倍量水，第二次加8倍量水，考虑水煎液浸泡时间过长容易滋生细菌变质，并结合生产可行性，设计浸泡0 h、0.5 h、1 h、2 h、6 h共5种样品，煎煮2次，每次30 min，过滤，合并滤液，药液定溶至250 mL，备用。
(2)总固体物收率测定
精密移取提取液25 mL，各两份，至已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105℃干燥，参照文献[10]，计算总固体物收率，运用spss23软件进行统计分析。结果见表2、表3、表4。
表2 浸泡时间对出膏率的影响(%)Tab.2 Influence of soaking time on paste yield
结果：单因素方差分析表明p<0.05，说明不同的浸泡时间对出膏率有显著性差异；
而因素多重比较结果表明浸泡时间0 h与0.5 h、1 h，无显著差异，与浸泡2 h、6 h出膏率有显著性差异。浸泡2 h和6 h无显著性差异。因此，确定浸泡时间为2 h。
表3 浸泡时间对出膏率单因素方差分析表Tab.3 Single factor ANOVA of soaking time on paste yield
表4 浸泡时间对出膏率因素多重比较结果Tab.4 Multiple comparison results of soaking time on paste yield
2.3.3 提取工艺参数正交试验
按照正交试验设计考察煎煮次数、煎煮时间、加水量三个影响煎煮效果的主要因素，按每个因素3水平，用L9(34)正交表安排试验(表5)。以出膏率为指标对提取工艺进行评价，优选最佳工艺条件，结果见表6、表7。
表5 因素水平表Tab.5 Factor-level table
表6 提取工艺条件L9(34)正交试验安排及直观分析结果Tab.6 L9(34)orthogonal test arrangement and results of extraction conditions
表7 提取工艺条件L9(34)正交试验方差分析结果Tab.7 L9(34)orthogonal test variance analysis results of extraction conditions
结果可知：各因素对出膏率的影响为A>C>B，A因素不同水平差异较大，最佳方案为A3C3B1；
但是从方差分析结果可见三个因素均无显著性差异，因此选择方案A3B1C1为最佳提取工艺。结合吸水率及浸泡时间结果，确定提取工艺为：饮片浸泡2 h，煎煮3次(首次加7.5倍量水，2、3次加6倍量水)煎煮时间30 min。
2.4 成型工艺考察
2.4.1 药汁用量考察
按提取工艺制备药汁3份，分别浓缩至密度1.10、1.20、1.30，备用。另取3份剩余处方量饮片混合粉碎过100目筛，混匀。以5%细粉起模、成型、盖面、干燥、选丸，即得成品，以成品成型程度、外观、成品量、溶散时限、重量差异作为指标筛选药汁密度，结果见表8。
表8 药汁用量对外观、成品量、溶散时限、重量差异的影响Tab.8 Influence of decoction amount on the appearance，weight， dissolution time and weight difference of the finished product
(1)重量差异
参照文献[9]中方法，以10丸为1份，取供试品10份，分别称定重量，再与平均重量比较，重量差异为±10%，超出重量差异限度的不得多于2份，并不得有1份超出限度1倍。
(2)溶散时限测定
取供试品6丸，选择孔径为1.0 mm的筛网，参照崩解时限检测法[9]进行检查，本品应在1 h内全部溶散；
操作过程中如供试品黏附挡板妨碍检查时，应另取6丸，以不加挡板进行检查，上述检查，应在规定时间内全部通过筛网，如有细小颗粒状物未通过筛网，但已经软化且无硬心者可按符合规定论。
结果可知：药汁密度1.10泛丸易成型但容易粘连；
药汁密度1.30泛丸不易成型且色泽不均匀、重量差异不符合规定；
药汁密度1.20易成型，色泽均匀，溶散时限、重量差异均符合规定，因此确定药汁浓缩密度为1.20。
2.4.2 起模用粉量考察
分别以3%、7%细粉量进行起模，以水丸的成型、外观、成品量、溶散时限及重量差异作为考察指标。结果见表9。
表9 起模细粉量筛选结果Tab.9 Screening results of fine powder amount
结果可知：3%的细粉起模不易成型，色泽不均匀，重量差异不符合规定；
7%细粉起模，不易成型，色泽不均匀，重量差异不符合规定；
5%细粉起模易成型，粒度适宜，色泽均匀，溶散时限及重量差异均符合规定，因此确定以5%细粉起模。
2.4.3 成型样品品干燥时间考察
以芍药苷含量、外观、水分、溶散时限为指标，设置温度为80℃，考察干燥时间(1 h、2 h、3 h)对成型样品的影响。
(1)干燥时间对芍药苷含量影响
1)对照品溶液的制备
取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含60 μg的溶液，即得。
2)供试品溶液的制备
取供试品约1 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，加稀乙醇20 mL超声处理(240 W，频率45 kHz)30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3)芍药苷含量测定
参照文献[10]，采用HPLC法对芍药苷含量进行测定，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)为流动相；
检测波长为230 nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。结果见表10、图1。
表10 干燥时间对芍药苷含量影响Tab.10 Influence of drying time on paeoniflorin content
图1 不同干燥时间HPLC图Fig.1 HPLC diagrams of different drying time
(2)干燥时间对外观、水分、溶散时限的影响
将样品至干燥箱内，设置温度为80℃，分别于干燥后1 h、2 h、3 h取样，考察外观、水分、溶散时限。结果见表11。
表11 干燥时间对外观、水分、溶散时限的影响Tab.11 Influence of drying time on the appearance， moisture and dissolution time of the finished product
以上结果可知，干燥时间分别在1 h、2 h、3 h条件下，成型样品芍药苷含量、外观、水分、溶散时限均无明显差异，干燥时间在1 h，水分超标，因此优选干燥时间为2 h。
2.4.4 成型样品干燥温度考察
取样品三份置于干燥箱中分别设置温度为60℃、70℃、80℃进行干燥，2 h后取出，以芍药苷含量、外观、水分、溶散时限为指标，考察干燥温度对成型样品的影响。
(1)干燥温度对芍药苷含量影响
按照2.4.3项下方法测定芍药苷含量，结果见表12，图2。
表12 干燥温度对芍药苷含量的影响Tab.12 Influence of drying temperature on paeoniflorin content
(2)干燥温度对外观、水分、溶散时限的影响
将样品至干燥箱内，分别设置60℃、70℃、80℃，于干燥后2 h取样，考察外观、水分、溶散时限。结果见表13。
图2 不同干燥温度HPLC图Fig.2 HPLC diagrams at different drying temperatures
表13 干燥温度对外观、水分、溶散时限的影响Tab.13 Influence of drying temperature on the appearance， moisture and dissolution time of the finished product
以上结果可知：干燥温度(60℃、70℃、80℃)下样品外观、溶散时限均符合要求，芍药苷含量明显变化，水分分别为11.5%、8.3%、6.2%。因此，优选80℃作为该工艺的干燥温度。
2.5 小试工艺参数验证
根据以上研究结果，初步确定鹿晶益气生血丸的生产工艺为：取处方中需提取饮片浸泡2 h，煎煮3次(首次加7.5倍量水，2、3次加6倍量水)煎煮时间30 min，过筛，合并滤液浓缩至相对密度1.20，作为润湿剂备用；
另取处方剩余饮片混合粉碎过100目筛，得细粉混匀；
取5%细粉与润湿剂起模，泛丸成型，0℃干燥2 h，选丸，即得。采用该工艺生产三批小试样品，检测成品的外观、水分、溶散时限、重量差异、芍药苷含量，验证生产工艺参数。结果见表14、表15、图3。
表14 鹿晶益气生血丸小试样品检测结果Tab.14 Appearance test results of Lujing Yiqi Shengxue pills
表15 三批小试样品芍药苷检测结果Tab.15 Detection results of paeoniflorin in three batches of small-scale test samples
图3 三批小试样品HPLC图Fig.3 HPLC diagrams of three batches of small-scale test samples
由以上结果可知：
三批小试样品外观、水分、溶散时限、重量差异、芍药苷含量参数，检测结果稳定与工艺研究数据相符，证明该工艺简便、稳定可控，有利于工艺生产。
通过鹿晶益气生血丸生产关键环节工艺研究，优选出最佳工艺参数，并进行了工艺参数验证，结果显示该工艺简便、稳定可控，可用于制剂生产，为该品种申请医院制剂备案批件，奠定了实验基础。
工艺研究中，处方中黄芪含纤维较多，粉碎困难，用于提取，药汁黏性过大，在成型过程中不易分散，且细粉量与药汁比例悬殊较大，故应对黄芪的提取和粉碎所占比例进行深入研究。后期应对包衣、包装工艺等参数进行研究，确保成品质量稳定可控。
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