胡振永，林伟俊，陈永培
（谢志辉生物医药研究院（广州）有限公司，广东 广州 511431）
随着社会经济发展，生活压力与日俱增，现代都市人群进入快节奏且饮食作息不规律的生活，如长期熬夜、睡眠不足等，加上目前空气污染，城市雾霾，紫外线照射，以及长期面对手机电脑等电子屏幕的辐射的现状，容易导致现代女性皮肤变得坑坑洼洼、黯淡无光，由此皮肤暗黄、色素沉着、色斑云集等不良症状越来越多见，改善肤色成为现代人类越来越重视的领域，美白功效的护肤品研发也备受关注[1-3]。
市售美白产品，美白剂较为单一，美白效果不强，还存在吸收效率不高因而美白效果不明显的问题。此外，市售美白产品中一般采用尼泊金酯类的防腐剂作为美白化妆品的防腐剂，其成分复杂容易引发过敏等皮肤不良反应[4-5]。对此，本文研制一款美白组合物，该组合物可促进美白剂进入真皮层发挥作用，大大提升美白效果，其美白效果优于市售单品，且组合物的配方温和不致敏。
1.1 仪器与材料
本实验用到的主要仪器设备与主要材料见表1和表2。
表1 主要仪器设备
表2 主要材料
1.2 美白祛斑护肤品的制备
1.2.1 美白组合物的制备
美白组合物的配方如表3 所示，其制备工艺流程如下：
表3 美白组合物配方
1）将各组分按配比准确称量，各组分依次加入主锅中，搅拌速度为200 r/min，搅拌至无团块。
2）开启均质，均质速度为3 000 r/min，均质时间为10 min，直至料体均匀。
美白组合物中还加入了α-熊果苷作为美白成分之一。熊果苷属氢醌苷化合物，化学名为4-羟基苯基-D-吡喃葡萄糖苷，存在于熊果、越橘等植物中，是一种新兴的无刺激、无过敏、配伍性强的天然美白活性物质。α-熊果苷对紫外线灼伤导致的瘢痕有较好的治疗功效，有较好的抗炎、修复和美白的作用，能够抑制黑色素的产生和沉积，祛除色斑和雀斑。
1.2.2 美白祛斑护肤品的制备
美白祛斑护肤品包括美白爽肤水以及美白精华套装，其配方见表4 和表5。
表4 美白爽肤水配方
表5 美白精华配方
美白爽肤水的制备工艺步骤如下：
1）把1，3-丙二醇、卡波姆、烟酰胺和乙酰壳糖胺依次加入低于45 ℃的水中分散均匀，在反应釜中加热至85 ℃，搅拌均匀；
2）降温至45 ℃，加入美白组合物、氢化磷脂搅拌均匀；
3）将用水预溶的精氨酸、泛醇加入搅拌锅搅拌均匀，再将加热溶解的PEG-80 氢化蓖麻油加入搅拌锅中搅拌均匀，出料。
美白精华的制备工艺步骤如下：
1）将1，3-丙二醇、甘油、甘油聚醚-26、透明质酸钠、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP 共聚物、丙烯酸酯类/C10-30 烷醇丙烯酸酯交联聚合物和1，2-戊二醇加入反应釜加热至85 ℃混合搅拌均匀；
2）降温至45 ℃，加入美白组合物、新戊二醇二庚酸酯、植物甾醇酯和VE 脂质体，搅拌均匀；
3）将精氨酸、羟乙基哌嗪乙烷磺酸、聚乙二醇90 M分别用水预溶好，加入反应釜搅拌均匀，将加热溶解后的PEG-60 氢化蓖麻油加入反应釜搅拌均匀，出料。
2.1 美白效果测试
对上述制得的美白祛斑护肤品和市售普通护肤品进行进行测试，共选取90 名受试者，随机分为9 组，每组10 名分别使用美白产品，受试者的平均年龄为31（25-35）岁，受试部位为下颌部，所有受试者的受试部位皮肤均无任何异常，排除敏感肌受试者。
受试者在8 周内每天涂抹美白产品，早晚各一次，每次0.3 g～0.5 g，使用14、28、56 d 后对受试者的下颌部分别采用Colorimeter 仪和黑色素皮肤检测仪对皮肤的亮泽度（L）和黑色素系数（b）进行测定，每次测定3 次后取平均值，接着再把整组内每名受试者得到的数据取平均值，得到皮肤光泽度及黑色素系数变化的数据。
整个测定过程均在良好的非创伤检测实验室中进行，温度为20 ℃±2 ℃，相对湿度为40%～60%，实验前，受试者先采用洁净水清洗测试部位并擦干，暴露测试部位，并静止30 min。
2.2 酪氨酸酶活性抑制率测试
目前公认的黑色素形成的路径为：酪氨酸作为黑色素的主要原料，受酪氨酸酶的催化，使酪氨酸转化为多巴，并催化多巴转化为多巴醌，进而转化为多巴色素，再转化为二羟基吲哚、酮式吲哚，最终转化为黑色素。研究表明，抑制酪氨酸酶的活性是阻止或缓解黑色素形成的关键。
测量多巴醌的含量可以得出使用美白护肤品对酪氨酸酶的抑制作用，而多巴醌的含量可以通过紫外线光谱仪来测定。
测定时反应在试管中进行，将1mL浓度为30mmol/L的左旋多巴及质量浓度为0.1 mg/mL 磷酸盐缓冲液分别与本文制得的美白祛斑护肤品和市售普通护肤品进行混合均匀，再放置于26 ℃的水浴中反应15min，随后加入酪氨酸酶溶液，使总反应体积为10 mL，再于26 ℃保温15 min，最后于分光光度计475 nm 处测定OD 值，并进行样品管OD 值和对照管OD 值的比较。计算出酪氨酸酶活力的抑制率。计算公式为：抑制率＝（抑制前酪氨酸酶总活性-植物提取物抑制后剩余酪氨酸酶活性）/抑制前酪氨酸酶总活性。
2.3 安全性测试
对上述制得的美白祛斑护肤品和市售普通护肤品进行测试，共选取270 名受试者，随机分为9 组，每组30 名，所有受试者的受试部位皮肤在测试前均无任何异常，对受试者根据2015 版《化妆品安全技术规范》人体皮肤斑贴试验判断标准进行斑贴实验，通过肉眼观察，24 h 后观察皮肤反应程度，其等级评分标准如下页表6 所示。
表6 人体皮肤斑贴试验等级评分标准
2.4 皮肤亮度和皮肤亮白度实验
采用色彩色差计CR-400 分析使用美白祛斑护肤品的志愿者皮肤亮度L* 值、皮肤亮白度ITA°值的变化情况，试用面积200 cm2～250 cm2，试用量0.3 mL～0.5 mL，试用部位：脸部，实验组为涂抹精华液的志愿者皮肤，对照组为市售普通护肤品的志愿者皮肤。
美白效果测试、酪氨酸酶活性测试以及安全性测试结果见表7 和表8。从表7 中可以明显看出受试者使用了本实验制备的美白祛斑护肤品在14 d～56 d内，皮肤亮度明显提升，黑色素明显下降，美白效果明显优于市售普通护肤品。从表8 可以可以看出，本实验制备的美白祛斑护肤品对酪氨酸酶活性抑制率、安全性测试明显高于市售普通护肤品，说明其阻止或缓解黑色素形成的效果更优，其配方更温和不致敏。
表7 美白效果测试结果
表8 护肤品性能测试
皮肤亮度和皮肤亮白度实验结果见图1 和图2。从图1 和图2 对比可以明显看出，本文制备的美白祛斑护肤品其皮肤亮度和亮白度明显优于市售普通护肤品。
图1 皮肤亮度实验对比
图2 皮肤亮白度实验对比
本实验制备的美白祛斑护肤品具有良好的美白祛斑效果，这是由于护肤品加入了肌肽、九肽-1，二甲砜和α-熊果苷等化合物。肌肽是具有强效抗氧化能力的多肽，可清除细胞中的自由基，在酪氨酸转变为黑色素的多步反应中，存在氧化还原反应，肌肽可阻断其中的氧化进程从而减少黑色素的生成。九肽-1是促黑素细胞激素（α-MSH）的竞争性拮抗抑制剂，通过与黑素细胞表面黑皮质素受体-1（MC1-R）竞争性结合，从而在源头上抑制黑色素的合成。二甲砜具有平滑肌肤，增强对霉菌、毒素、细菌及过敏物质抵抗力，对糖类的代谢起促进作用，能促进伤口愈合，亦能提升细胞渗透效率，提高人体细胞对功效物质的吸收效率。α-熊果苷有较好的抗炎、修复和美白的作用，能够抑制黑色素的产生和沉积，祛除色斑和雀斑。产品中还添加了烟酰胺等酪氨酸酶活性抑制剂，其中烟酰胺还能减缓黑色素向角质层传递，对黑素细胞无毒，安全高效[6-8]。
本文使用肌肽、九肽-1、酵母精华素、α-熊果苷、甘草酸二钾、二甲砜和植物天然防腐剂协同配合，制备得到一种具有美白效果的组合物和美白祛斑护肤品，美白祛斑护肤品包括美白爽肤水和美白精华套装。测试结果表明，美白祛斑护肤品具有优异的美白祛斑效果，可促进美白剂进入真皮层，不仅可大大提升美白效果，而且配方温和不致敏。
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