【摘要】目的:探讨慢性乙型肝炎患者血清转化生长因子TGF-β1、血小板衍生生长因子PDGF-BB、基质金属蛋白酶MMP-2、基质金属蛋白酶抑制因子TIMP-1与肝纤维化的关系。方法:采用放射免疫法检测80名乙肝患者的TGF-β1、PDGF- BB、MMP-2、TIMP-1水平,同时进行肝组织活检,分析TGF-β1、PDGF- BB、MMP-2、TIMP-1与肝组织纤维化程度分期和炎症活动度分级的关系。结果:TGF-β1、PDGF、MMP-2、TIMP-1四指标随肝纤维化程度、炎症分级的增加而升高(P[1]。目前肝组织检查是诊断肝纤维化及其它肝病的金标准,肝纤维化的诊断主要依赖于肝组织穿刺病理诊断。但由于此检查属于有创检查,患者依从性差,临床上难以将肝穿刺活体组织学检查作为常规检查手段[2],而使用无创手段筛查可提高检查效率、降低医疗费用。本文通过测定转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其抑制因子-1(TIMP-1),研究其与肝纤维化病理的关系。
1 对象与方法
1.1 研究对象:80例慢性乙肝患者均为2006年3月至2008年12月我院传染科及肝胆科住院患者。慢性乙型肝炎诊断标准符合2000年修订的病毒性肝炎防治方案[3]。所有患者男性39例,女性41例,年龄为24～55岁。上述病例经血清学检查均排除了甲、丙、丁、戊、庚型肝炎病毒感染。以40例体检正常人员为对照组,男性24例,女性16例,年龄为25～55岁。各组间性别和年龄分布无显著性差异(P>0.05)。
1.2 指标检测:所有样本均为清晨空腹采血3ml,37℃水浴30min,1500r/min离心5min,分装血清于-30℃冰箱冻存备检。TGF-β1,PDGF- BB,MMP-2,TIMP-1采用放射免疫法进行,试剂盒由北京北方生物研究所提供,严格按照试剂盒说明书操作。
1.3 病理检查:穿刺标本及术中切取标本用10%甲醛溶液固定,制成常规石蜡切片,进行HE和网状纤维染色,由我院病理科专业医师按2000年西安《病毒性肝炎防治方案》病毒性肝炎组织病理学诊断标准[3],进行炎症分级(G1～G4)纤维化分期(S0～S4)。
1.4 统计学分析:采用SPSS13.0软件进行F检验、SNK-q检验和Spearman等级相关分析。P0.05)。见表1。
2.2 血清纤维化指标与肝组织炎症分级的关系:结果表明,TGF-β1、PDGF- BB、MMP-2、TIMP-1四指标对照组、G1～G4 组间比较差异有统计学意义(P[4]。TGF-β1是一类具有多种生物学活性的细胞生长因子,具有诱导细胞转化、分化和抑制细胞增殖等多种功能。在肝脏,TGF-β1不仅是细胞外基质(ECM)在肝内细胞结构重塑的调节物,而且在急慢性肝炎时,肝性腹腔积液中TGF-β1可诱导肝细胞凋亡。在成人,与组织修复和免疫系统调节过程有关,调控细胞外基质(ECM)的合成和降解,刺激ECM的合成,抑制ECM的降解,抑制细胞外蛋白水解酶的活性[5]。PDGF-BB是sis原癌基因的表达产物,主要由巨核细胞合成。在肝脏,PDGF可由非实质细胞如枯否氏细胞、肝窦内皮细胞分泌。当肝脏受损时,巨噬细胞、血小板、浸润的炎细胞、受损的内皮细胞及激活的肝脏星形细胞(HSC)均可合成PDGF- BB,并以自分泌和旁分泌的方式发挥作用[6]。PDGF- BB能够强烈刺激HSC的增殖和迁移,促使其胶原的产生和沉积,并诱导HSC合成转化生长因子、胰岛素样生长因子等细胞因子,在肝纤维化的发生和发展中作用非常重要。
肝损伤后,活化的HSC不仅表达多种基质金属蛋白酶(MMPs)并裂解MMPs酶原成为活性形式,还能合成MMPs活性调节因子如金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)等,从而调节ECM降解。MMP-2能降解Ⅳ型胶原,MT1-MMP和活化的MMP-2还通过其他机制发挥促纤维生成的作用。例如,MMP-2促进HSC 的增殖与活化,此作用与MMP-2的催化作用相关。MMP-2促有丝分裂的机制尚未明确,可能是因为MMP-2导致细胞.基质间相互作用的变化以及与基质结合的生长因子的释放。另外,最近研究表明I型胶原存在时,培养的HSC介导的MMP-2酶原活化显著增加。I型胶原可与活化HSC的盘状结构域受体相互作用,介导MMP-2的活化[7]。TIMPS是近年发现的抑制基质金属蛋白酶活性的一组多功能因子家族。TIMPs是组织中MMPs主要内源性抑制因子,还可抑制其对ECM的降解活性,导致肝纤维化发展成肝硬化,有关研究表明,TIMP对MMP抑制被认为是肝纤维化产生的原因。MMP 与TIMP 的平衡在肝纤维化形成过程中起着至关重要的作用,肝纤维化的形成主要是由于TIMP 蛋白的进行性升高,使MMP活性受到抑制,TIMP\MMP比值逐渐上升,进一步说明基质合成、降解平衡的逐渐失调加速了肝纤维化的形成[8]。
本研究显示,TGF-β1、PDGF- BB、MMP-2、TIMP-1随着病理分期S1～S4期增加,肝组织纤维的增加,由此从病理学角度证明这4个血清指标的水平与肝组织纤维化发展的阶段性及纤维化程度一致。进一步相关分析表明,血清TGF-β1、PDGF- BB、MMP-2、TIMP-1水平与肝脏纤维化分期存在密切的正相关。它们对判断早期纤维化有明显临床意义,提示这4个指标能够作为肝脏纤维化独立因子用于临床早期肝纤维化的诊断。同理,TGF-β1、PDGF- BB、MMP-2、TIMP-1水平亦随着炎症程度增加而增加,且与肝脏炎症分级密切相关。通过对TGF-β1、PDGF- BB、MMP-2、TIMP-1的检测,对于判断肝脏纤维化的病理分级等具有临床实际应用价值。
参考文献
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作者单位:530023 广西中医学院第一附属医院检验科