【摘要】目的：探讨建立碎石利排汤的质量控制方法。方法：用薄层色谱法对碎石利排汤中的金钱草进行定性鉴别，并采用分光光度法对总黄酮进行含量测定。结果：薄层色谱分离效果好，斑点清晰，易于识别；平均加样回收率98.4%（n=5），RSD=2.6%。结论：该方法较简单，重现性好，可作该制剂质量控制标准。
【关键词】碎石利排汤；分光光度法
文章编号：1009-5519（2008）17-2591-02 中图分类号：R28 文献标识码：A
碎石利排汤为我院开发的一种自制制剂，由金钱草、海金沙、牛膝等组成。用于治疗泌尿系统结石、体外震波碎石后的排石以及尿路感染。本文采用薄层色谱法对其中的主药金钱草进行了薄层鉴别分析，用分光光度法测定碎石利排汤中的主要化学成份总黄酮的含量，为碎石利排汤提供了质量控制方法。
1 仪器与试药
紫外分光光度仪（岛津UV-2101PC），薄层层析硅胶G板（青岛海洋化工厂）。实验用化学试剂均为分析纯。金钱草对照药材（中国药品生物检定所），碎石利排汤（自制）。
2 金钱草的鉴别[1]
2.1 供试品溶液的制备：取本品10 ml，用氯仿萃取4次（50 ml/次）。弃去萃取液，水层用乙酸乙酯-丙酮（1∶1）溶液萃取（50 ml/次）。合并萃取液，减压浓缩至3 ml作为供试品溶液。
2.2 阴性对照液的制备：取缺金钱草的碎石利排汤10 ml按上法制备阴性对照液。
2.3 金钱草对照液的制备：取金钱草药材3 g，加50 ml水煮1 h，过滤。滤液浓缩至5 ml，加无水乙醇5 ml，离心过滤。滤液蒸干，加10 ml水溶解，用乙酸乙酯-丙酮（1∶1）溶液萃取3次（10 m/次）。合并萃取液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，定溶至1 ml即得。
2.4 薄层鉴别：吸取供试品溶液、金钱草对照溶液、阴性对照溶液各2 ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-丙酮-甲酸（15∶3∶1）为展开剂展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，于105 ℃烘5 min，在紫外灯下（365 nm）检视。样品色谱中在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝色荧光斑点，阴性对照无干扰。见图1。
3 总黄酮的含量测定
3.1 对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品5 mg于25 ml容量瓶中，加60%乙醇约15 ml，密塞，超声使其溶解，放至室温，加入60%乙醇至刻度，摇匀，即得（每1 ml含芦丁200 μg）。
3.2 供试品溶液的制备：精密吸取本品置10 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释到刻度，涡旋混匀，转移至离心管中离心，上清液即为供试品溶液。
3.3 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，
4.0，5.0，6.0 ml于25ml容量瓶中，各加水到6ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，摇匀，放置6 min，加10%三氯化铝试液1 ml，摇匀，放置6 min，再加5%氢氧化钠10 ml，最后加入至刻度，摇匀。以第一管为空白对照，按照分光光度法，在510 nm测定吸收度，以吸收度（A）为横坐标，芦丁浓度（C）为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：C=0.08155A+2.378×10-3(r=0.9996)。
3.4 稳定性试验：精密量取供试品溶液3 ml，按标准曲线项下方法，自“分别置于25 ml的容量瓶中”起，同法操作。采用紫外分光光度计的time-course功能在510 nm测定比色液的稳定性，测定时间为60 min，测定间隔为6 s。结果表明供试品溶液与三氯化铝形成的络合物不稳定，30 min内下降3%，建议定容后立即测定。
3.5 重复性试验：取同一批号，称取5份，按供试品溶液的制备和标准曲线下方法测定总黄酮的含量，结果平均值为2.6%，RSD=0.8%（n=5）。
3.6 加样回收率试验：取已知总黄酮含量的样品溶液，精密吸取含0.1 g置于10 ml容量瓶中，加入对照品溶液（0.2000 mg/ml）10 ml，然后按供试品溶液的制备和标准曲线项下方法测定总黄酮的含量，计算回收率，结果平均加样回收率为99.8% RSD=2.6%，结果见表1。
3.7 样品测定：精密量取供试品溶液4 ml于25 ml容量瓶中，加水至6 ml，然后按标准曲线项下方法测定总黄酮的含量，结果见表2。
4 讨论
4.1 提取溶剂的选择：在对金钱草进行薄层鉴别时，为有效地排除低极性成分干扰，样品溶液制备时，采用氯仿萃取，然后弃去氯仿萃取液。黄酮类成分在60%乙醇中有较大的溶解度。
4.2 鉴别金钱草是以金钱草做对照药材，而不以熊果酸为对照品，是因为本品组方中所含牛膝的干扰，牛膝中所含的齐墩果酸与熊果酸在TLC中无法分开，两者与硫酸显色后均形成紫色斑点。
参考文献：
[1] 杨晓惠.常用中药材真伪理化鉴别[M].北京:中国医药科技出版社，1994.380.
收稿日期：2008-03-26 修回日期：2008-04-18