【摘要】 目的:探索从老翘中提取总黄酮的最佳工艺。方法:以总黄酮含量为指标,应用正交实验,优化老翘总黄酮的提取工艺。结果:总黄酮最佳工艺为:20倍量70%乙醇在80℃下回流提取2小时。结论:该工艺简单可行,是提取老翘总黄酮的有效途径。
【关键词】 老翘;总黄酮;提取工艺
【中图分类号】 R282.5【文献标识码】 B【文章编号】 1007-8517(2009)24-0056-01
Study on extraction technology of total flavonoids from grown Forsythia Suspensa
Ma Xue-mei, Ma Wen-bing
(College of Chemical Engineering and Enviroment, North University of China, Shanxi Taiyuan 030051)
Abstract: ObjectiveTo study and optimize the extraction technology of the total flavonoids from grown Forsythia Suspensa. Methods The orthogonal design was used to optimize the extraction technology with the content of the total flavonoids as an index. Results The optimum extracting technology was as follow: with twenty times 70% ethanol, extracted for two hours at 80℃. Conclusion This method can be applied to the extraction of the total flavonoids from grown Forsythia Suspensa because it is simple and feasible.
Key words: grown Forsythia Suspensa; Total flavonoids; Extraction technology
连翘为木犀科(Oleaceae)连翘属(Forsythia)植物连翘(Forsythia suspense(Thunb.)Vahl)的干燥果实。连翘药材商品分为“青翘”和“老翘”,果实初熟尚带绿色时采收称为青翘,果实熟透颜色发黄时采收称为老翘[1]。现代药理表明其有抗菌、强心、利尿、镇吐等作用,是许多中药制剂的主要原料,药用价值明显。因此,众多学者对其进行了化学成分和活性研究,表明其提取物有一定的抗氧化活性[2-3]。黄酮类化合物是一类天然抗氧化剂,具有清除人体中超氧离子自由基、抗衰老和增强机体免疫力的生理活性[4-5]。因此,测定老翘中黄酮总含量并优化其提取工艺有重要意义,为连翘资源的综合利用提供理论依据和技术参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 TU-1901型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司);XMTF-1000-2型旋转蒸发仪(上海预康科技有限公司);JJ200精密电子天平(常熟双杰测试仪器厂);DFT-100手提式高速中药粉碎机(温岭大德中药机械有限公司)。
1.2 试药 老翘2009年3月购自山西省太原市仁和大药房;芦丁(中国药品生物制品检定所);乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠和硝酸铝均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 总黄酮的测定[6]
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取120 ℃干燥恒重的芦丁标准品10 mg,置50 ml容量瓶中,用60%乙醇溶解并定容得到浓度为0.2 mg/ml对照品溶液,备用。
2.1.2 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液各0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 ml分别置于25 ml容量瓶中,再依次加入1 ml 5 %亚硝酸钠溶液,摇匀,放置6 min后加入1 ml 10%硝酸铝溶液,摇匀,放置6 min后加入4%氢氧化钠溶液1 ml,再加30%乙醇定容,摇匀,放置15 min后在510 nm处测定吸光值。以吸光度值为y轴,芦丁浓度(mg/ml)为x轴,制作标准曲线。得到回归方程为Y = 14.4288X + 0.0068,r = 0.9993, 线性范围3.91-43.60 μg/ml。
2.1.3 样品溶液的制备 准确称取阴干粉碎的老翘10 g,于500 ml三颈圆底烧中,以一定浓度的乙醇作为提取溶剂,控制提取液温度,利用索氏提取器减压回流提取。提取液在旋转蒸发仪上浓缩成膏状后于60 ℃真空干燥箱中干燥至恒重,准确称取干燥粉末20 mg用60%乙醇溶解并定容于10 ml容量瓶中。依照2.1.2项下方法测定吸光度,代入回归方程中计算总黄酮的含量,并计算总黄酮的收率:总黄酮的收率(%)=(提取液中总黄酮浓度×提取液体积)/对应的原料重量×100%
2.2 单因素实验
2.2.1 提取溶剂浓度对总黄酮收率的影响
图1乙醇浓度对总黄酮收率的影响
由图1可看出,随着乙醇浓度的增加黄酮收率呈上升趋势。用70%-90%乙醇提取得率较高,80%的得率最高。当乙醇浓度高于80%时,提取液颜色加深并且总黄酮得率开始下降。这可能是由于提取溶剂极性减少使提取液中脂溶性物质增加,使总黄酮含量相对下降。同时用70%和90%乙醇提取的总黄酮得率接近,因此80%乙醇提取效果最好。
2.2.2 提取时间对总黄酮收率的影响
图2 提取时间对总黄酮收率的影响
由图2可看出,随着提取时间的增加,总黄酮收率也随之增加。当提取时间达到2 h以后,总黄酮收率增加趋势不明显,且提取液颜色显著加深,可能是由于提取时间的增加使杂质溶出量也增加。从总黄酮得率来看,提取时间为2 h,2.5 h和3 h得率较高且较为接近。因此,选择2 h为最佳提取时间。
2.2.3 提取温度对总黄酮收率的影响
图3 提取温度对总黄酮收率的影响
由图3可看出,总黄酮收率随温度升高而增大。提取温度在60℃和70℃时的总黄酮收率较低。当温度高于70℃,总黄酮收率随温度增大而明显升高。提取温度在80-100℃之间总黄酮收率变化不大,考虑到乙醇沸点低于80℃且高温会破坏黄酮类化合物的稳定性。因此选中最佳提取温度为80℃,提取过程中保持该温度不变。
2.2.4 料液比对总黄酮收率的影响
图4 料液比对总黄酮收率的影响
由图4可看出开始随着料液比的增大总黄酮收率增加,当料液比为1:25时达到最大,继续增大料液比总黄酮收率下降。料液比的增加会造成后续操作(如浓缩纯化)的难度和成本增加。综合考虑认为1:20为最佳料液比。
正交实验考察采用L9(3��3)正交表考察最佳工艺条件。正交实验因素水平安排见表1,实验结果见表2。
表1
正交实验因素水平表
水平A提取时间 t/hB乙醇浓度 (%)C料液比 (g : ml)11.560%1 : 152270%1 : 2032.580%1 : 25
表2
L9(3��3)正交实验结果
实验号ABC黄酮收率 (%)11112.0521222.2731332.3642122.1552232.3962312.5173131.9483222.5893312.26K16.686.146.82K27.057.247.00K36.787.136.69k12.222.042.27k22.352.412.33k32.262.382.23R0.371.100.31
由表2分析可知,影响老翘总黄酮收率的因素主次顺序为B�A�C,即乙醇浓度�提取时间�料液比。老翘总黄酮提取的最佳工艺为A2B2C2,即70%乙醇浓度,料液比1 : 20,回流提取2小时。在该工艺条件下,总黄酮得率可达到2.61%。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中国药典(2005年版1部)[S]. 北京:化学工业出版社,2005: 117.
[2]柴渭莉,刘静,杨建雄,等.连翘叶对油脂抗氧化作用的研究[J].陕西师范大学学报(自然科学版),2004, 32: 187.
[3]刘静,杨建雄,李小丹.连翘叶提取物抗油脂氧化作用的实验研究[J].陕西教育学院,2006, 22 (2): 93.
[4] 汪河滨,周忠波,罗 锋,等.甘草黄酮提取方法及抗氧化活性研究[J].时珍国医国药,2008, 19 (9): 2106.
[5] Huang YL, Yeh PY, Shen CC, Chen CC.Antioxidant flavonoids from the rhizomes of Helminthostachys zeylanica[J].Phytochemistry, 2003, 64 (7): 1277.
[6] 涂宗财,汪国忠,陈 钢,等.黄姜茎叶中总黄酮的提取工艺研究[J].食品工业科技,2009, 4:236.