【摘要】 目的：研究艾滋病病毒感染对外周血T淋巴细胞亚型的影响。方法：采用流式细胞计数仪检测我市1155例HIV感染者外周血中T淋巴细胞亚型的变化。结果：HIV感染者CD4细胞百分数和CD4/CD8比值显著降低，CD8细胞百分率明显升高，差异有统计学意义（p0.05）。结论：HIV感染者T淋巴细胞亚群的检测，对判断病情和评估疗效均有重要的临床价值。
【关键词】 FCM；HIV；T淋巴细胞亚群
Analysis of T lymphocyte phenotype of 1155 HIV infected persons in peripheral blood
Li qiao qing Chen yan zhi
People� hospital of Bao shan Yun Nan Province 678000 China
【Abstract】 Objective: To study HIV infection on T lymphocyte subtype of peripheral blood.Methods: The peripheral blood T lymphocyte phenotype changes of 1155 HIV infected persons detected by Flow Cytometric in our city. Results: percentage of CD4 cell and ratio of CD4/CD8 HIV infected significantly decreased, percentage of CD8 cell was significantly higher, the difference was statistically significant (p 0.05). Conclusion: The detection of T lymphocyte subsets in HIV infected persons for judging the conditions of patient and assessment of effect of curing disease has important clinical value.
【Keywords】 FCM;HIV;T cell subsets
【中图分类号】 R512.91 【文献标识码】 Ｂ 【文章编号】 1007-8231（2011） 07-0288-03
准确可靠的CD4+T淋巴细胞检测是评价HIV感染者免疫功能状况，预测病程进展，确定疾病分期和治疗时期，评价抗病毒药物治疗效果和估测预后的主要指标。进行性CD4+T淋巴细胞损耗可能与临床上出现严重症状有关，也预示可能预后不良。世界卫生组织（WHO）和欧美等国家均推荐HIV感染者每3－6个月监测一次CD4+T淋巴细胞水平，并以该指标作为开始预防间质性浆细胞肺炎和其它机会性感染，以及开始抗逆转录病毒治疗的因素。我院按照国家抗病毒治疗的相关规定执行，我科HIV检测实验室为抗病毒治疗提供及时、准确的数据。
1资料与方法
1．1临床资料
1155例患者均为我市HIV抗病毒治疗病人，男688例，女467例。最大年龄75岁，最小年龄2岁，平均年龄（36.5±13.87）岁。
1．2仪器与试剂
仪器为美国BD FACSCalibur流式细胞分析仪
使用BD CaliBRITE微球，运行FACSComp软件进行仪器的质量控制。
定期进行仪器校准，做好室内质量控制，参加实验室能力验证。
使用 MultiSET软件及配套三色试剂CD3CD4CD8来获取和分析T淋巴细胞亚群。
1.3流式细胞术计数法原理
流式细胞术(FCM)是对细胞和微粒进行快速、灵活、定量分析分类的高精技术，它融合了激光、电子计算机、单克隆抗体、荧光素化学、细胞化学染色等技术的优点。其基本原理是以激光为光源，将被检细胞用荧光标记抗体结合后输入流式细胞仪，通过高速流动系统对细胞排列成行，一个一个的流经检测区，当细胞从流动室喷嘴处流出时，超声振荡搅动液流，使液流断裂成一连串均匀的小滴，每滴内最多只含有一个细胞，细胞经荧光探针的光反应和标记物的光散射能力中获取信息，由光电倍增管接收并转化成脉冲信号，并进行增强，数据经电脑处理、分辨细胞的类型从而检测出各类淋巴细胞。
1．4检测方法
标本使用抗凝全血，在Falcon流式进样管内加入20ul T淋巴细胞CD3CD4CD8抗体和反向加样50ul全血，轻轻充分混匀，置室温避光处放置15min，加入10倍稀释FACS溶血素450ul，置室温避光处放置15min。用MultiSET自动软件获取15000个淋巴细胞，自动分析T淋巴细胞免疫亚型，报告CD4+,CD8+T淋巴细胞百分率CD4+,CD8+T淋巴细胞绝对计数及CD4+/CD8+比值。
1．5统计学处理
实验数据用SPSS 13.0软件包处理，数据采用均数±标准差（x±s）表示。
2结果
2.1HIV感染者T淋巴细胞亚群结果如下：
HIV感染者CD4+细胞百分率，CD4+,CD8+T淋巴细胞绝对计数，CD4+/CD8+比值显著降低，CD8+细胞百分率则明显增加。结果见表1。
2．2HIV感染者年龄，性别对细胞免疫功能的影响：结果见表2。
2.3成人及青少年艾滋病分期标准（CDC，美国，1993年）（见表3)
CD4 3.4在T淋巴细胞分类中，CD4代表T辅助细胞而CD8代表T抑制细胞和T杀伤细胞。CD4+T淋巴细胞是HIV感染的主要靶细胞，而其本身又是免疫反应的中心细胞；CD8+T淋巴细胞是免疫反应的效应细胞。正常人的CD4+T淋巴细胞约占总的T淋巴细胞的65%，CD8+T淋巴细胞约占35%。
3.5人体感染了HIV后，涉及的主要病理过程就是免疫系统的损害，主要表现为：CD4+T淋巴细胞的丢失，绝对计数的减少，同时CD8+T淋巴细胞数量增加，CD4和CD8的比例失调。因此CD4+，CD4+T淋巴细胞计数作为直接测定免疫功能的方法，是提供HIV感染病人免疫系统损害状况最明确的指标。
3.6用于HIV感染者的疾病分期：凡CD4+T淋巴细胞＜200/mm3或CD4+T淋巴细胞的百分比＜14%的HIV感染者可归入艾滋病。
3.7判断HIV感染者的临床合并症（各种机会性感染与CD4+T淋巴细胞的相关性），如CD4+T淋巴细胞＜200/mm3时，很容易发生卡氏肺囊虫肺炎；而巨细胞病毒感染和鸟分支杆菌感染常发生于CD4+T淋巴细胞＜50/mm3的病人，极少见于CD4+T淋巴细胞＞100/mm3的病人。帮助确定抗HIV药物治疗及机会性感染预防性治疗的适应症，例如，当CD4+T淋巴细胞＜200/mm3时，应给予抗卡氏肺囊虫肺炎的预防性治疗。
3.8通过检测1155例HIV感染者的T淋巴细胞亚群，结果显示：HIV感染者CD4+细胞百分率及CD4+/CD8比值显著降低，而CD8+细胞明显增高。其中CD4+细胞百分率≤14%者占26.6%，提示部分人已发展为AIDS。不同年龄的HIV感染者不影响T淋巴细胞亚群在外周血中的表达，但不同性别的HIV感染者3项指标均存在一定的差异，从结果分析看，男性CD4+细胞百分率和CD4+/CD8+比值下降比女性更显著。
3.9抗HIV药物疗效的重要判断指标
HIV感染是指人体感染HIV后直至发展为AIDS的全过程，时间长，临床表现错综复杂。随着对HIV抗病毒治疗工作的深入和发展，本院对我市1155例抗病毒治疗病人的T淋巴细胞亚群进行检测分析，结合HIV病毒载量检测和耐药监测，以了解HIV感染者T淋巴细胞亚群的特点及其与艾滋病病情的关系，对HIV感染病人进行临床分期，指导临床医生对抗病毒治疗药物调整，，指导艾滋病患者的抗病毒治疗，确定治疗时机，选择治疗方案，评价治疗效果，为我市的防艾工作提供科学有效的数据。总之，HIV感染者定期检测T淋巴细胞亚群，对制定最恰当的治疗计划，指导预防方案和进行临床治疗均有重要的临床意义。
参考文献
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