【摘要】 目的 建立紫黄止血消炎粉中盐酸小檗碱的含量测定方法。方法 采用高效毛细管电泳法，用熔融石英毛细管柱64．5 cm×50 μm,有效长度56 cm；0．02 mol/L磷酸缓冲溶液pH7．0．甲醇(82∶18)，分离电压为20 kV,毛细管柱温25℃,UV检测波长254 nm。结果 盐酸小檗碱进样浓度16．8~84 μg/ml内线性关系良好(r=0．999 6),平均加样回收率为98．25%，RSD为1．01%。结论 该方法灵敏、快速、准确，结果可靠，可用于紫黄止血消炎粉中盐酸小檗碱的含量测定。
【关键词】 盐酸小檗碱；高效毛细管电泳法
HPCE determination of berberine content in Zi．Huang Styptic power YU Wei,HU Yi．bing.Hunan Academy of Traditional Chinese Medicine，Changsha Hunan 410013，China
【Abstract】 Objective To establish a method for determination of berberine content in Zi．Huang Styptic power by HPCE.Methods The capillary electrophoretic conditions were fused．silica capillary column(64．5 cm×50 μm,56 cm)，running buffer of0．02 mol/L phosphate buffer solution(pH7．0)．methanol(82∶18),separation voltage of 20 kV，column temperature of 25℃ and detection wave length at 254 nm.Results The stand curve was liner over the range 16．8．84 μg/ml with the correlation coefficient 0．999 6．The average recovery was 98．45%with RSD=1．4%(n=6).Conclusion The HPCE method is sensitive,rapid and accurate.It can be used to control the quality of Zi．Huang Styptic power.
【Key words】 Berberine;HPCE
紫黄止血消炎粉系由黄连、大黄、紫珠、白及等七味中药组成的中药六类新药，具有活血、止血、消炎止痛、解毒生肌的功效，用于体表擦伤，局部出血或渗液红肿、疼痛并能防治感染、促进伤口愈合。方中黄连为君药。为有效控制该制剂的质量，本文采用HPCE法测定黄连中盐酸小檗碱的含量，本法简便易行，准确可靠，可作为本品的质量控制方法。
1 仪器与试药
仪器：HP．3D 高效毛细管电泳仪；盐酸小檗碱对照品购于中国药品生物制品检定所;试剂：甲醇为色谱纯试剂，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 电泳条件 用熔融石英毛细管柱64．5 cm×50 μm,有效长度56 cm；0．02 mol/L磷酸缓冲溶液pH7．0．甲醇(82∶18)，分离电压为20 kV,毛细管柱温25℃,UV检测波长254 nm。
2．2 对照品溶液的制备 分别精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0．08 mg的溶液。
2．3 供试品溶液的制备 精密称取紫黄止血消炎粉1．0 g，精密加入盐酸．甲醇(1∶100)50 ml，60℃水浴加热30 min，室温放置过夜，加盐酸．甲醇(1∶100)补足减失重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。
2．4 线性关系考察 精密称取盐酸小檗碱对照品置10 ml量瓶中，加甲醇制成每1 ml含0．084 mg的对照品溶液，分别取该溶液0．2、0．4、0．6、0．8、1．0 ml，分别置于1 ml容量瓶中加甲醇至刻度，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。线性方程为Y=6 666．1X．2 789．5，r=0．999 6，盐酸小檗碱16．8~84 μg/ml范围内与峰面积呈现良好线性关系良好。
2．5 精密度试验 取2001205批样品的同一份供试品溶液,连续进样6次，以盐酸小檗碱面积计算，RSD=1．01%。
2．7 加样回收率试验 取已知含量的供试品，加入对照品适量，按供试品制备方法制备并测定，结果见表1。结果表明，本方法加样回收率好。
3 讨论
3．1 目前盐酸小檗碱常用的定量方法有薄层扫描法和高效液相色谱(HPLC)．紫外光检测法，但薄层扫描法系统误差较大；采用高效液相色谱(HPLC)．紫外光检测法测定时，由于生物碱的碱性强极性大，往往被色谱柱吸附太强，造成色谱峰峰形不好，甚至拖尾，虽然也有通过改善流动相介质取得一定效果，但对色谱柱的污染很大，从而降低其使用寿命。由于制剂中化学成分复杂,薄层色谱分离困难，故本文使用高效毛细管电泳法，建立了紫黄止血消炎粉中盐酸小檗碱的含量测定方法，结果：从以上盐酸小檗碱含量测定方法学考察试验结果可知该方法简单方便，准确，灵敏度高，精密度好，能够准确测定样品中盐酸小檗碱的含量。
3．2 曾分别用0．02 mol/L 醋酸钠溶液．甲醇(80∶20)、0．02 mol/LNa2B�4O�7溶液．甲醇(80∶20)、0．02 mol/L磷酸缓冲溶液PH7．0．甲醇(80∶20)等缓冲溶液进行分离实验，实验结果表明前两种缓冲溶液分离效果较差，不能达到基线分离。而采用0．02 mol/L磷酸缓冲溶液pH7．0．甲醇(80：20)分离样品有良好的基线分离效果。
3．3 HPCE法测定生物碱时，EOF(电渗流)对PH值的强依赖性，导致tm对pH值的强依赖性，因此缓冲溶液pH值成为影响tm重现性的关键参数；同时由于离子的电泳淌度直接正比于它的有效电荷，而离子的有效电荷受操作缓冲溶液pH值影响，缓冲溶液的调节与控制是优化分离的重要对策，通过实验采用磷酸缓冲溶液pH7．0，分离效果好。当pH值太小时，生物碱成盐好且溶解性好，但由于pH值降低使EOF降低，从而使迁移时间延长，峰形变宽，分离不理想；pH值>7．0时，有部分不成盐生物碱被游离出来，影响测定结果。
参考文献
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2 杨骏，刘翠兰，李洁.HPLC法测定知柏龙胆片中盐酸小檗碱的含量测定.上海中医药杂志，2007，41(5)：79．80.
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