[摘要] 目的:建立野木瓜片质量标准中的含量测定方法。方法:用HPLC法测定野木瓜片中绿原酸的含量,以十八烷基键合硅胶为固定相,乙腈∶0.1%磷酸(体积比11∶89)为流动相,流速为1 ml/min,测定波长为327 nm。结果:绿原酸在10.21～102.1 μg/ml浓度范围内有良好的线性关系(r=1.000 0),回收率为98.90%(RSD=0.8%)。结论:本法测定野木瓜片中的绿原酸含量,结果稳定、准确可靠,可作为该品种的质量控制方法。
[关键词] 野木瓜片;绿原酸;高效液相色谱法
[中图分类号] R927.2 [文献标识码]C [文章编号]1674-4721(2010)04(a)-114-02
Determination of chlorogenic acid in Caulis stauntoniae cbinensis tablet
LI Guogiang1,2, ZHOU Benhong1, WU Guoqiu2, ZHANG Zhijian2
(1.Wuhan University,Wuhan 430072,China;2.Guangzhou Huacheng Pharmaceutical Factory, Guangzhou 510555,China)
[Abstract] Objective:HPLC was used to determine the content of chlorogenic acid in Caulis stauntoniae cbinensis tablet. Methods:The study indicated that the effects of separation and determination were optimum when deter-mination parameters were as follows:analytic column:Shim-pack VP-ODS column,the mobile phase was acetonitrile-0.1% Phosphate (11∶89), The flow rate was 1 ml/min; UV detectionwavelength was 327 nm. Results:The repressive equation had a good linear relationship (r=1.000 0). The relationship of injection amounts and peak was linear in the range of 10.21-102.1 μg/ml and recovery rate was 98.9%(RSD=0.8%).The method was simple and available,accuracy and good reproducibility. Conclusion:This Caulis stauntoniae cbinensis tablet determination of chlorogenic acid content,the results are stable, accurate and reliable,can be used as the variety of quality control methods.
[Key words] Caulis stauntoniae cbinensis tablet;Chlorogenic acid; HPLC
野木瓜片为木通科植物野木瓜的干燥茎及叶经水提、浓缩、干燥成干膏后制成颗粒压制成片而得。其功能与主治为祛风止痛、舒筋活络。用于风邪阻络型三叉神经痛,坐骨神经痛,风湿关节痛。野木瓜含有多种化学成分,主要有去甲五环三萜皂苷类化合物、木脂素苷类化合物、黄酮类和酚性成分等。野木瓜片原标准收载于部颁中药14册,标准号为WS3-B-2777-97,原标准只对黄酮类进行显色鉴别及以野木瓜对照药材进行薄层鉴别。本文取用高效液相色谱法测定野木瓜片中绿原酸的含量,并进行方法学研究。
1 资料与方法
1.1 仪器与试药
SHIMADZU SPD-10A 型高效液相色谱仪,HW色谱工作站,绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供(110753-200413),乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯,野木瓜片(广州市花城制药厂生产)。
1.2 色谱条件
色谱柱:Hypersil BDS C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相:乙腈∶0.1%磷酸(11∶89),流速为1 ml/min,测定波长为327 nm。柱温:室温。理论塔板数不低于2 000。在此条件下,对照品、供试品在约8 min相同时间有一色谱峰,如图1、2。
1.3 溶液的制备
1.3.1对照溶液的制备取绿原酸对照品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加50%甲醇配制成每1 ml含绿原酸0.1 mg的溶液,即得。
1.3.2供试品溶液的制备取野木瓜片3片,除去包衣,研碎,取细粉0.2 g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入50%甲醇25 ml,称定重量,超声处理30 min,稍置室温,再称定重量,加50%甲醇补足减少的重量,摇匀,滤过,取续滤液,作为供试品溶液。
1.3.3线性关系的考察精密吸取绿原酸对照品溶液(0.102 1 mg/ml),分别加50%甲醇稀释成以下浓度:10.21、20.42、40.84、51.05、102.1 μg/ml,分别吸取10 μl,注入液相色谱仪中,按上述色谱条件测定对照品峰面积,将样品浓度(C)与峰面积(A)进行回归处理,得回归方程为:C=-0.397 6+4.397e-5A,r=1.000 0,表明绿原酸对照品在10.21～102.1 μg/ml范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。
2 结果
2.1 精密度试验
精密吸取供试品溶液10 μl,按上述色谱条件,重复进样6次,测定绿原酸峰面积值,RSD为0.6%,结果表明本法精密度良好。详见表1。
2.2 稳定性试验
按精密度试验中的样品作稳定性试验考察,分别于0、2、6、10、24 h测定其含量1次,在24 h内,RSD为0.9%,详见表2。
2.3 回收率试验
取本品约0.1 g,共6份,精密称定,置锥形瓶中,精密加入50%甲醇15 ml,再精密加入绿原酸对照品10 ml,超声处理30 min,其余按样品测定项法操作、测定,计算回收率。结果平均回收率为98.90%,RSD=0.5%,详见表3。
2.4 重复性试验
取本品约0.2 g,共6份,精密称定,照样品测定项法进行测定,计算含量,RSD为1.0%。详见表4。
2.5 样品测定
取野木瓜片3批样品,依供试品制备方法制备供试品溶液,依上述色谱条件测定含量。测得3批样品绿原酸含量分别为1.19、1.22、1.20 mg/g。
3 讨论
有关制剂中绿原酸的高效液相测定方法已有很多种,本文把流动相调整为乙腈∶0.1%磷酸(11∶89),结果绿原酸的峰形较好。本方法供试品溶液制备方法简便易行,在该色谱条件下绿原酸峰分离效果良好,回收率符合要求,结果理想,能真实反映野木瓜片中绿原酸的含量,可用于其质量控制。
[参考文献]
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(收稿日期:2010-03-03)