【摘要】 目的 建立HPLC测定麝香接骨片中血竭含量的方法。方法 色谱柱:Diamonsil C��18�(Φ4�6×250 mm)(迪马钻石);流动相:乙腈�0�05mol/L磷酸二氢钠溶液(50:50);流速:1�3 ml/min;柱温:40℃;进样量:20μl;检测波长为440nm。结果 血竭素在0�069～0�621 μg范围内呈良好的线性关系。结论 该法简便、准确,适应于该药的质量控制。�
【关键词】
麝香接骨片,血竭,高效液相色谱法
HPLC Determination xuejie content in shexiangjiegu tablets
JIA Gui�long, SHI Chun�ying,CHE Xuan.
Pharmacy department of Dongfeng hospital,Jilin 136300,China
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【Abstract】 Objective to establish HPLC determination xuejie of shexiangjiegu content� Methods chromatographic column: Diamonsil C ��18� ( 4�6 × Φ 250 mm ) (Dima diamond); mobile phase: acetonitrile�0�05mol/L dihydrogen phosphate solution (50: 50); velocity: 1�3 ml/min; column temperature: 40 ℃; injection volume: 20 μ l; detection wavelength for 440nm� Results dracorhodin perchlorate in 0�069 ~ 0�621 μg range is good linear relation�Conclusion The method is simple, accurate, fit for drug quality control��
【Key words】
shexiangjiegu tablets, xuejie, HPLC
本品血竭为方中主要药材及细贵药材,血竭中所含血竭素为血竭有效成份。具有活血散瘀、镇痛止血、敛疮生肌等功效,用于跌打损伤,瘀血作痛,外伤出血��[1]�。本实验采用HPLC法对麝香接骨片中的血竭素进行含量测定。�
1 方法�
1�1 仪器与试药 岛津LC�10A高效液相色谱仪(日本);SPD�10A检测器;血竭素高氯酸盐对照品(批号:0811�9302供含量测定用),由中国药品生物制品检定所提供;乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯。�
1�2 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C��18�(Φ4�6×250 mm)(迪马钻石);流动相:乙腈�0�05mol/L磷酸二氢钠溶液(50:50);流速:1�3 ml/min;检测波长为440nm;理论板数按血竭素峰计算应不低于3000。�
1�3 对照品溶液的制备��[2]� 精密称取血竭素高氯酸盐对照品适量,加3%磷酸甲醇溶解制成每1 ml含20 μg的溶液,即得(每1 mg血竭素高氯酸盐相当于0�726 mg血竭素)。�
1�4 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品适量,研细,取0�5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入3%磷酸甲醇溶液20 ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率33KHz)20 min,放冷,称定重量,以3%磷酸甲醇溶液补足减失的重量,�
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作者单位:136300
吉林省东丰县医院药剂科�
摇匀,离心,取上清液,用微孔滤膜(0�45 μm)滤过,取续滤液,即得。�
2 方法学考察�
2�1 流动相和测定波长的选择 参考中国药典2000年版��[1]�一部血竭项下【含量测定】的相关条件并结合具体情况,确定色谱条件为:乙腈�0�05 mol/L磷酸二氢钠溶液(50�∶�50)溶液系统为本法流动相,流速1�3 ml/min;检测波长为440 nm。�
2�2 线性关系的考察 精密称取血竭素高氯酸盐对照品3�45 mg,置50 ml量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液定容至50 ml,制成每1 ml含69 μg的溶液。分别精密吸取1、3、5、7、9 μl,注入液相色谱仪,测定,以对照品进样量为横坐标,以峰面积值为纵坐标绘制标准曲线(见图11),计算回归方程,Y=(2�882e+0�2)C+5159�553 (r=0�9999)结果表明血竭素在0�069～0�621 μg范围内呈良好的线性关系,符合外标法定量测定的要求。�
2�3 精密度试验 精密吸取供试品溶液20 μl,注入液相色谱仪,重复进样6次,测定其色谱峰面积值,RSD=0�33%,结果表明,仪器的精密性良好。�
2�4 稳定性试验 取本品供试品溶液,按色谱条件测定,分别于0、3、6、9、12 h测定,其峰面积RSD=0�81%,结果表明,在12 h内,测定值基本稳定。�
2�5 重现性试验
取同一供试品依方法独立测定六次,其含量RSD=1�0%,结果表明,本法重现性良好。�
2�6 加样回收率试验
精密称取同法测定已知含量的供试品6份,分别精密加入血竭素高氯酸盐对照品0�3594 mg(折合成血竭素0�261 mg),依法测定,计算回收率,测得平均回收率为98�9%,RSD%=1�2%,结果表明,本法回收率较好,准确度较高。�
2�7 样品测定结果及限度
依方法测定样品三批,结果见表1。�
根据样品的含量测定结果,暂定本品每片含血竭以血竭素计,不得少于0�15 mg。�
2�8 原料药材的测定结果
依法(中国药典2000年版一部血竭含量测定方法)测定三批投料药材,结果三批血竭中血竭素的含量为1�85%、1�81%、1�83%,均符合药典规定。�
方法��[3]�:取血竭药材适量,研细,精密称取0�05～0�15 g,置具塞试管中,精密加入3%磷酸甲醇溶液10 ml,密塞,振摇3 min,滤过,精密量取续滤液 1 ml,置5 ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为供试品溶液。精密称取血竭素高氯酸盐对照品9 mg,置50 ml棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液使溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1 ml,置5 ml棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为对照品溶液。(每1 ml中含血竭素26 μg)(血竭素重量=血竭素高氯酸盐重量/1�377)��[4]�。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl,注入液相色谱仪,测定,即得。�
3 讨论�
血竭素极其不稳定,见光易分解。故实验中使用3%磷酸甲醇溶液作为溶剂,使血竭溶于3%磷酸甲醇溶液转化为血竭素磷酸盐,增强其稳定性,并使用棕色容量瓶,操作过程注意避光。�
参 考 文 献�
[1] 中国药典2000年版一部.�
[2] 分析化学.�
[3] 邹桂欣,尤献民,王树实,等�HPLC法测定胃溃疡胶囊中血竭素的含量�辽宁中医杂志,2003,30(4):310�311��
[4] 王宝琴�中成药质量标准与标准物质研究�北京:中国医药科技出版社,1994�514��